[发明专利]一种尿液中3-烷化腺嘌呤DNA加合物的测定方法

摘要

一种尿液中3-烷化腺嘌呤DNA加合物的测定方法，即3-甲基腺嘌呤（3-MeA）、3-乙基腺嘌呤（3-EtA）和3-羟乙基腺嘌呤（3-HOEtA）的测定方法其特征在于：其测试过程是24小时尿液在室温下解冻，混合均匀离心过滤，通过OasisMCX固相萃取小柱净化富集，混匀后引入LC-MS/MS系统分析，可准确检测出尿液中3-MeA、3-EtA和3-HOEtA的含量水平。本发明为全新的尿液中3-烷化腺嘌呤DNA加合物的测定方法，采用氘代标准品作为内标定量分析物可以减少样品前处理过程中引起的误差、串联质谱法更好的提高了方法的选择性与准确性和灵敏度。通过色谱柱以及洗脱条件的选择与优化，较好的提高了色谱分离过程，缩短了色谱分析的时间，减少了有机溶剂的消耗量。

主权项

 一种尿液中3‑烷化腺嘌呤DNA加合物的测定方法，即3‑甲基腺嘌呤（3‑MeA）、3‑乙基腺嘌呤（3‑EtA）和3‑羟乙基腺嘌呤（3‑HOEtA）的测定方法，其特征在于：包括以下具体步骤：a、样品前处理：尿液在室温状态下解冻并混合均匀，取4 mL尿液，加入4mL超纯水，加入100 μL混合内标，用水浴锅调节温度到75‑85℃，取超纯水稀释至8 mL后的尿液置于固相萃取柱中；固相萃取用Waters Oasis MCX固相萃取柱，预先用2 mL甲醇、5 mL水溶液活化，上样量为8 mL，用2 mL 10％甲醇/水溶液淋洗，然后用1 mL乙酸乙酯淋洗，最后用甲醇/乙酸乙酯/氨水混合液洗脱，收集洗脱液并于60 ℃下用氮气吹至干，然后用100 μL水溶液溶解，供LC‑MS/MS分离分析；b、标准工作液的配制：用乙腈配制不同浓度的3‑甲基腺嘌呤(3‑MeA)标准工作溶液、3‑乙基腺嘌呤（3‑EtA）标准工作溶液和3‑羟乙基腺嘌呤（3‑HOEtA）标准工作溶液；c、液相色谱‑串联质谱（LC‑MS/MS）测定，吸取配制好的不同浓度的3‑甲基腺嘌呤(3‑MeA)标准工作溶液、3‑乙基腺嘌呤（3‑EtA）标准工作溶液和3‑羟乙基腺嘌呤（3‑HOEtA）标准工作溶液，注入LC‑MS/MS系统，得到线性回归方程，对样品待测液进行测定，测得分析物与内标峰面积的比值，代入一元线性回归方程，求得样品待测液中分析物的含量。