[发明专利]一种检测玉米赤酶烯酮的方法

摘要

本发明公开了一种检测玉米赤酶烯酮的方法，是采用Mannich法制备玉米赤酶烯酮的免疫抗原和检测抗原，免疫Balb/c小鼠，并获得相应的多抗血清，血清经过分离纯化后，间接ELISA检测其效价；然后将检测抗原包被于酶标板上，过夜、封闭，再加入标准毒素溶液、样品提取液，以及稀释后的多抗；反应后，加入羊抗鼠IgG-HRP，再加入底物溶液显色，终止后，在450nm处检测OD值，绘制相关标准曲线，进而求出待测样品中ZEN的含量，有益效果：更有效的利用参加反应的毒素分子，从而节省成本；整个过程简便、易于操作、毒素分子的利用率也相对较高；该检测方法操作简便，无需专业人员培训，便于实地生产应用。

主权项

一种检测玉米赤酶烯酮的方法，具体步骤如下所述：第一步、制备阳离子化蛋白，主要制备阳离子化牛血清蛋白cBSA和阳离子化鸡卵清蛋白cOVA；第二步、采用Mannich法制备免疫抗原ZEN‑cBSA和检测抗原ZEN‑cOVA；第三步、取健康的6‑8周雌性Balb/c小鼠4只，初次免疫用完全弗氏佐剂乳化后腹腔注射，每只鼠免疫剂量为100μg ZEN‑cBSA，注射体积为0.2mL；之后加强免疫每两周腹腔注射一次，乳化用不完全弗氏佐剂；最后一次免疫使用生理盐水代替不完全弗氏佐剂，采用尾静脉注射，注射剂量和前面几次相同；一共免疫6次；从第3次免疫开始，每次免疫后10天断尾取血，间接ELISA检测小鼠血清效价；第四步、小鼠在最后一次免疫后的第10天，摘眼球取血，处死小鼠；所获血液先置于室温下2h，然后在4℃条件下3500rpm离心20min，离心之后的血清冻存于‑20℃的冰箱中；第五步、纯化离心后的血清，间接ELISA确定血清效价；第六步、检测抗原包被于酶标板上，在4℃条件下过夜；第七步、使用乙腈‑水提取待检样品中的毒素，乙腈与水的体积比为85:15；第八步、洗涤酶标板，加入封闭液，反应2h；第九步、洗涤，冻存酶标板；或者加入标准毒素溶液、样品提取液，添加稀释后的血清上清；第十步、洗涤，加入二抗羊抗鼠IgG‑HRP反应；第十一步、洗涤，加入底物液显色；第十二步、终止，450nm处酶标仪检测反应孔OD值。