[发明专利]顺式环氧琥珀酸水解酶的固定化方法及其固定化酶在审
| 申请号： | 201410098975.2 | 申请日： | 2014-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN103882000A | 公开（公告）日： | 2014-06-25 |
| 发明（设计）人： | 王云山;王自强;李彦良;苏志国 | 申请（专利权）人： | 中国科学院过程工程研究所 |
| 主分类号： | C12N11/12 | 分类号： | C12N11/12;C12N11/10;C12N9/14;C12N15/70;C12P7/46 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋;侯桂丽 |
| 地址： | 100190 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种顺式环氧琥珀酸水解酶的固定化方法。该固定化方法通过将组氨酸标签与顺式环氧琥珀酸水解酶进行融合表达，利用组氨酸咪唑基与亲和层析介质中的金属离子Ni2+之间的相互作用，实现了顺式环氧琥珀酸水解酶在亲和层析介质上的固定化；该固定化方法的酶活性收率高，所得固定化酶稳定性好、催化效率高，并且省略了酶的分离纯化步骤，操作简单。 | ||
| 搜索关键词： | 顺式 琥珀酸 水解 固定 方法 及其 | ||
【主权项】：
一种顺式环氧琥珀酸水解酶的固定化方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将顺式环氧琥珀酸水解酶基因的N末端或C末端与组氨酸标签连接，构建二者的融合表达载体；（2）将步骤（1）所得融合表达载体转化工程菌，获得重组工程菌；（3）将步骤（2）所得重组工程菌进行培养及诱导表达，得重组表达工程菌；（4）收集重组表达工程菌，并进行菌体破碎，固液分离，收集上清液；（5）步骤（4）所得上清液经过Ni2+螯合层析介质进行螯合反应，即得固定化顺式环氧琥珀酸水解酶。
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