[发明专利]一种利用LAMP快速检测中国番茄黄化曲叶病毒的方法

摘要

本发明公开了一种利用环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)快速检测中国番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus,TYLCCNV）的方法，包括反应体系及该反应体系中包含的特异性引物组，通过DNA提取、LAMP扩增、电泳检测或荧光染色等步骤实现。该方法具特异性强、灵敏度高、简便快速、成本低等优点，且无需PCR仪等特殊仪器及凝胶电泳等设备，便于实验室及田间病毒病样品的快速检测。

主权项

一种利用LAMP快速检测中国番茄黄化曲叶病毒的方法，其特征在于通过如下步骤实现：（1）采用CTAB法提取待测植株叶片的总DNA；（2）以DNA为模板，采用以下特异性引物组进行LAMP扩增，得到扩增产物：FIP 5′‑ACTACAACCTGAGGAAAGCGTTAGTCCAGATTTTGCAGGTTAG‑3′BIP 5′‑ACTTGTAATGTGATTATGTCGTGGTCAAAAATCCCCTTTATTTCAAGA‑3′F3 5′‑AACGCAAGGTCTGAGGAT‑3′B3 5′‑AGCAGAGAATGGCGTTTA‑3′（3）检测电泳检测：取5 μL扩增产物经2% 琼脂糖凝胶在0.5×TBE缓冲液和120V电压条件下电泳30 min，感染TYLCCNV的样品为明亮的呈弥散状的核酸泳带； 荧光染色：在扩增产物中加入SYBR GreenⅠ(1:1000) 2 μL，1‑5 min后观察结果，感染TYLCCNV的样品由橙色变成绿色，未感染TYLCCNV的样品及空白对照保持染料的橙色。