[发明专利]一种磷酸化蛋白质组样品快速处理方法

摘要

本发明涉及一种磷酸化蛋白质组样品快速处理方法，利用高浓度胰蛋白酶可以促进蛋白快速酶解的优势，发展了一种新型、综合细胞裂解和蛋白酶解于一体的样品处理方法，并将其应用于磷酸化蛋白质组学的分析。得益于高浓度的胰蛋白酶同时促进了细胞裂解和蛋白酶解这一深层机理，细胞样品只需一步即可完成到肽段混合物的快速转变，在磷酸肽富集过程中，非磷酸化肽段以及其他各种质谱不兼容的杂质，均可被去除。本发明仅需25min即可实现从细胞到肽段之间的快速转变，而在对照正常组中，最简易的方法也至少需要16h；并且通过HeLa实际细胞样品的分析，获得了比对照组较优的质谱鉴定覆盖率，证明了这种样品预处理方法的准确性和高效性。

主权项

一种磷酸化蛋白质组样品快速处理方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）将数量为10 000‑500 000个的 HeLa细胞样品加入50‑100 μL反应体系内；（2）将上述步骤（1）得到的反应体系加入胰蛋白酶后在振荡器上涡旋震荡至全部细胞膜破碎，所述反应体系中的胰蛋白酶的浓度为250 ng/µL‑1.0 µg/µL；（3）将上述步骤（2）中得到的混合物溶液放置于30‑40 ℃水浴超声器内超声孵育；超声孵育反应时间为25 min‑1 h；（4）将上述步骤（3）中超声孵育后的混合液在通过离心机控制的、且填充了800 µg‑2 mg 固定化金属钛离子亲和色谱材料的GELoader Tip枪头内进行磷酸肽富集，将所得磷酸化肽段放入冻干机冻干；得处理后的磷酸化蛋白质组样品。