[发明专利]一种可溶性表达人脑利钠肽重组蛋白的方法和应用有效
| 申请号： | 201410139968.2 | 申请日： | 2014-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN103923937A | 公开（公告）日： | 2014-07-16 |
| 发明（设计）人： | 邹卫;张世光;周晓雷;宋浩雷;延志芬 | 申请（专利权）人： | 石家庄沃泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62;C07K14/575;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/18;A61K38/22;A61P9/04 |
| 代理公司： | 苏州威世朋知识产权代理事务所(普通合伙) 32235 | 代理人： | 杨林洁;东楠 |
| 地址： | 050000 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种可溶性表达人脑利钠肽（HumanBrainNatriureticPeptide，hBNP）重组蛋白的方法，包括如下步骤：1）获得重组基因：获得表达人脑利钠肽重组蛋白的重组基因His-DsbAmut-BNP，所述重组基因的序列包括5’至3’方向依次排列的纯化标签基因序列、分子伴侣蛋白基因序列、蛋白酶识别位点序列和人脑利钠肽基因序列；2）获得重组质粒：将上一步获得的重组基因插入载体质粒，获得含有重组基因的重组质粒；3）获得基因工程菌：将上一步获得的重组质粒转化宿主细胞获得基因工程菌；4）表达外源基因：基因工程菌发酵，表达含有重组人脑利钠肽的融合蛋白；5）纯化目的蛋白：裂解菌体，收集融合蛋白，通过蛋白酶酶切去除分子伴侣、层析纯化步骤获得重组人脑利钠肽重组蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 可溶性 表达 人脑 利钠肽 重组 蛋白 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种可溶性表达人脑利钠肽重组蛋白的方法，包括以下步骤：1）获得重组基因：获得表达人脑利钠肽重组蛋白的重组基因rhBNP，所述重组基因rhBNP的序列包括5’至3’方向依次排列的纯化标签基因序列、分子伴侣蛋白基因序列、蛋白酶识别位点序列和人脑利钠肽基因序列；2）获得重组质粒：将上一步获得的重组基因rhBNP插入质粒，获得含有重组基因rhBNP的重组质粒；3）获得基因工程菌：将上一步获得的重组质粒转化宿主细胞获得基因工程菌；4）表达外源基因：基因工程菌发酵表达含有重组人脑利钠肽的融合蛋白；5）纯化目的蛋白：裂解菌体，收集融合蛋白，通过融合蛋白的酶切、纯化步骤获得重组人脑利钠肽重组蛋白。
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