[发明专利]一种小叶矮生型广玉兰的嫩茎段离体培养方法

摘要

本发明涉及一种小叶矮生型广玉兰的嫩茎段离体培养方法，属于植物组织培养技术领域。所述的方法包括以下步骤1)、拟接种材料的选择与预处理，2）、外植体的消毒，3）、无菌系的建立，4）、丛生芽的诱导与增殖培养，5）、壮苗与生根培养，6）、试管苗的炼苗与移栽。本发明具有的有益效果丛生芽的诱导率达到90%以上，壮苗生根培养后的生根率达到96%以上，存活率可达96%以上，繁殖速度快、繁殖率高、脱病毒及提纯复壮等优点，克服现有技术中繁殖系数低、周期长、受季节限制等缺陷，可在短时间内工厂化生产优质种苗以满足城乡绿化之需。以一个茎段为例，一年内可工厂化快速繁殖种苗上万株，且质量优异。

主权项

一种小叶矮生型广玉兰的嫩茎段离体培养方法，其特征在于，包括以下歩骤：1)、拟接种材料的选择与预处理：选取当年萌发的半木质化新枝，剪去已展平的叶片，用洗衣粉冲洗三遍，置于自来水龙头下冲洗3h；2)、外植体的消毒:在超净台上，先用75％(vol)乙醇溶液消毒1～2min，然后用0.2％(vol)的新洁尔敏溶液消毒15min，最后用10％(vol)次氯酸钠溶液消毒15～20min，用无菌水冲洗三遍后无菌滤纸吸干水份；3)、无菌系的建立：在超净台上将嫩枝切成1.3～2.0cm长的茎段，每个茎段带1～2个茎节，切除切口处因消毒而坏死的组织，将外植体培养于第一培养基进行新芽的诱导培养，培育成无菌系；用于建立无菌系的第一培养基的配方为：MS+0.5～1mg/L ZT+1.0～2.0mg/L BA+0.05～0.1mg/L NAA+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5～6.5g/L，pH值为5.6～5.8；4)、丛生芽的诱导及增殖：待茎段新芽伸长至1cm以上时，将新芽切下接种至第二培养基上诱导丛生芽，并在该培养基上进行丛生芽的增殖；第二培养基的配方为：MS+2～3mg/L KT+0.2～0.3mg/L NAA+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5～6.5g/L，pH值为5.6～5.8；5)、将丛生芽在靠近试管苗最下面的叶片着生处下面0.3～0.4mm处切成单芽，切口为每个单芽最下面的叶片着生处下面0.3mm～0.4mm处，并将单芽接种于第三培养基进行壮苗生根培养；用于试管苗壮苗与生根的第三培养基的配方为：1/2MS+0.5～1.0mg/L IBA+0.5～1g/L AC+蔗糖20g/L+琼脂粉5.5～6.5g/L，pH值为5.6～5.8；6)、试管苗的炼苗与移栽：将生根的试管苗移栽至泥炭和珍珠岩混合的基质中，浇足水后用塑料薄膜覆盖保温保湿防失水萎蔫，7天后揭开薄膜炼苗，每天叶面喷水3～5次，15～20天后施肥料液；30～35天后移栽至灌满纯泥炭的塑料穴盘中，经3～4个月培养后直接移栽至土壤或大的容器中。