[发明专利]一种用产丁二酸重组大肠杆菌细胞制备富马酸的方法有效
| 申请号： | 201410144056.4 | 申请日： | 2014-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN104974971B | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 方晓江;马江锋;刘经伟;李泽壮;刘丽娟;王英武;陈韶辉;杨爱武 | 申请（专利权）人： | 中国石化扬子石油化工有限公司;中国石油化工股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P7/46;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 万婧 |
| 地址： | 210048 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种产丁二酸重组大肠杆菌细胞的制备方法，属于生物工程技术领域。本发明步骤如下：（1）利用重组大肠杆菌采用两阶段发酵生产丁二酸；（2）丁二酸发酵结束时，采用沉降法收集菌体回收低活性的产丁二酸重组大肠杆菌细胞；（3）将回收低活性的产丁二酸重组大肠杆菌细胞，转入新鲜培养基中，通空气或者氧气，并维持40%～60%的溶氧，温度及发酵液pH值分别控制在33℃～36℃和6.8～7.5。本发明回收细胞的方式由于就在原发酵罐内进行，因此可以大大降低染菌的几率以及减少对细胞的损伤。细胞回收率最高可达91%。以回收的低活性的产丁二酸重组大肠杆菌为催化剂，丁二酸钠为底物，有氧转化合成富马酸，其转化率达到92%以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 产丁二酸 重组 大肠杆菌 细胞 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用产丁二酸重组大肠杆菌细胞制备富马酸的方法，其步骤如下：(1)利用重组大肠杆菌采用两阶段发酵生产丁二酸；(2)丁二酸发酵结束时，采用沉降法收集菌体回收细胞，回收低活性的产丁二酸重组大肠杆菌细胞；(3)将回收低活性的产丁二酸重组大肠杆菌细胞，转入新鲜培养基中，通空气或者氧气，并维持60％的溶氧，温度及发酵液pH值分别控制在36℃和7.5，其中，所述的步骤(3)中的新鲜的培养基为JSM‑CN培养基；所述低活性的产丁二酸重组大肠杆菌细胞是指经过厌氧发酵36h或48h后回收的细胞；所述JSM‑CN培养基是指以JSM发酵培养基为基础，去除葡萄糖、磷酸氢二铵、氯化铵和硫酸铵；所述重组大肠杆菌为菌株Escherichia coli AFP111。
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