[发明专利]一种以粗孔微球硅胶为内核的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体的制备方法

摘要

本发明涉及一种以粗孔微球硅胶为内核的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体及其制备方法，包括以下步骤：a.粗孔微球硅胶的活化；b.酶-硅胶混合液的共沉淀；c.酶-硅胶混合液的共沉淀聚体的共价交联；d.以粗孔微球硅胶为内核的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体的回收和保存，本发明方法克服了传统交联酶聚体需要反复的离心或过滤所导致交联酶聚体凝聚成块的问题，提高了催化效率，且可降低生产成本、多次重复使用，更适合于大规模酶反应器。

主权项

一种以粗孔微球硅胶为内核的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体的制备方法，其特征是包括以下步骤；a、粗孔微球硅胶的活化：将粗孔微球硅胶浸入20%的盐酸中浸泡8h，然后用蒸馏水洗涤，真空干燥；b、酶‑硅胶混合液的共沉淀：称取步骤a中活化的粗孔微球硅胶50‑150mg，缓慢加入苯丙氨酸解氨酶酶液中，缓慢搅拌10min，然后加入硫酸铵粉末，边加入边搅拌,使得最终硫酸铵的质量百分浓度达到40%，得到酶‑硅胶混合液的共沉淀聚体悬浮液；c、酶‑硅胶混合液的共沉淀聚体的共价交联：向步骤b所得酶‑硅胶混合液的共沉淀聚体悬浮液中加入戊二醛水溶液，令最终戊二醛的体积百分浓度为0.1‑0.3%，在4‑25℃条件下搅拌交联1‑3h，得到共价交联的混合物；d、以粗孔微球硅胶为内核的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体的回收和保存：将步骤c得到的共价交联的混合物在4‑25℃条件下静置1‑5min，取固体沉淀用Tris‑HCl缓冲液洗涤3次，直至上清溶液中检测不出来苯丙氨酸解氨酶活性，冷冻真空干燥，得苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体，最终将干燥后的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体保存在4℃；所述的Tris‑HCl缓冲液摩尔浓度为50mmol/L,pH值为8.8。