[发明专利]小鼠成肌细胞的制备方法及其应用

摘要

本发明公开采用机械组织分离，原代培养基培养，在细胞形成40-80％丰度时加分化培养基直至肌管被诱导形成小鼠成肌细胞。采用此方法从每克小鼠肌肉中能分离到约1×10⁸个细胞，其中成肌细胞和卫星细胞的比例达到90％以上。成肌细胞在研究肌管形成及肌肉发育细胞、分子机理方面具有重要作用。

主权项

一种小鼠成肌细胞的制备方法，该方法包括下列步骤：A）将刚离体、并剪碎的小鼠腿部肌肉按体积比1：2加入分散剂，在37℃颠倒摇动5‑10min，1000rpm离心5min，去上清，得组织碎片；B）组织碎片中按体积比1：2加入分散剂，在37℃上下颠倒摇动5‑10min成浆糊状，按体积比1：10加入血清以终止酶消化；C）过滤80μm无菌尼龙网，去除大的组织碎片，滤液1000rpm离心5min，去上清，得沉淀；D）沉淀置胶原蛋白包被的培养皿中，加原代成肌细胞生长培养基，在37℃，5%CO2的培养箱中培养；E）当成肌细胞生长到40‑80％丰度时，去生长培养基，加分化培养基，每天更换分化培养基持续培养成肌细胞，直至肌管被诱导形成；其中，分散剂组成是0.2%胶原酶和0.05%分散酶，余量为PBS，pH=7.5‑7.8;原代成肌细胞生长培养基由80%F10，19%FBS，1%青霉素和链霉素，2.5‑5.0ng/mL碱性成纤维细胞生长因子bFGF组成；分化培养基由94‑97%DMEM，2‑5%马血清，1%青霉素与链霉素组成。