[发明专利]一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法有效
| 申请号： | 201410157596.6 | 申请日： | 2014-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN103993027B | 公开（公告）日： | 2017-09-26 |
| 发明（设计）人： | 李宁;孙照霖;康倩倩;李秋燕;赵蕊 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学;北京济福霖生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/873;C12N5/073;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，具体为1）构建自我剪切元件TmOCN；2）构建带有自我剪切元件的打靶载体；3）筛选阳性克隆细胞；4）体细胞克隆获得F0代标记基因去除的阳性猪。其中剪切元件TmOCN中TmO代表精简的小鼠早期胚胎发育转录因子OCT4的特异启动子；C代表Cre重组酶基因；N代表转基因动物常用的neo筛选标记基因。所述自我剪切元件TmOCN在SCNT过程中的猪早期胚胎发育阶段特异启动Cre酶进行自我剪切，达到在F0代自动敲除标记基因的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 转基因 筛选 标记 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)构建自我剪切元件TmOCN；2)构建带有自我剪切元件的打靶载体；3)筛选阳性克隆细胞；4)体细胞克隆获得F0代标记基因去除的阳性猪；所述自我剪切元件TmOCN包括:精简的小鼠早期胚胎发育转录因子OCT4的特异启动子、Cre重组酶基因和转基因动物常用的neo筛选标记基因；所述步骤2)将步骤1)构建的自我剪切元件TmOCN替换于普通的打靶载体的正筛选基因当中，得到带有自我剪切元件的打靶载体；所述步骤3)将步骤2)得到的带有自我剪切元件的打靶载体，转染猪胎儿成纤维细胞，进行正负筛选获得打靶成功的阳性克隆细胞。
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