[发明专利]一种食源性致病菌DNA的阶段控温快速提取方法在审
| 申请号： | 201410161363.3 | 申请日： | 2014-04-22 |
| 公开（公告）号： | CN104059906A | 公开（公告）日： | 2014-09-24 |
| 发明（设计）人： | 熊晓辉;熊丽莎;陆利霞;程月花;游京晶 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/445;C12R1/42;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 211816 江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明一种食源性致病菌DNA的阶段控温快速提取方法。本发明方法将菌液离心、收集菌体，通过洗涤缓冲液洗涤后，加入裂解液快速油浴裂解，再水浴处理，离心取上清液即为模板DNA。使用本方法提取的DNA纯度OD260/OD280为1.6-1.8，能够满足PCR、荧光PCR以及环介导等温扩增等快速检测技术对食源性致病菌进行分子检测的要求。本发明方法综合运用了阶段控温对细胞裂解、去除蛋白质等抑制剂从而释放出DNA，操作简单，时间短，且无需特殊实验仪器及试剂，实验成本低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 食源性 致病菌 dna 阶段 快速 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种食源性致病菌DNA的阶段控温快速提取方法，该方法包括如下步骤：(a)取1‑5mL食源性致病菌培养液，8000‑12000rmp离心1‑4min，使细菌细胞沉淀，弃上清；(b)往步骤(a)制得的菌体沉淀中加入100‑500uL无菌双蒸水，充分混合，8000‑12000rmp离心1‑4min，弃上清；(c)往步骤(b)制得的细菌沉淀中加入100‑500uL细胞裂解液，悬浮细菌沉淀，并于105℃‑126℃油浴10s‑3min；(d)将步骤(c)所得的混合液立即移至70℃‑95℃中水浴5‑30min；(e)步骤(d)结束后，8000‑12000rmp离心1‑4min取上清，上清液即为模板DNA，对提取所得DNA用于分析检测，剩余DNA于‑20℃保存备用。
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