[发明专利]一种水蛭的DNA条形码分子鉴定方法

摘要

本发明公开了一种水蛭(宽体金线蛭)的DNA条形码分子鉴定的方法和其CO I序列，使用该方法进行聚合酶链式反应(PCR)扩增出水蛭CO I基因，PCR产物经过琼脂糖胶进行验证后送至测序公司进行测序，将测序结果通过手工校对、序列拼接，并与公开序列进行比对，如果与所述基因序列SEQ ID NO.1的同源性在99％以上，即可判断所述的待测组织即为宽体金线蛭来源。本发明采用可靠的DNA分子鉴定技术，快速、准确的鉴定了宽体金线蛭品种，增强了准确性和可靠性，确保了水蛭作为药材入药的安全性。

主权项

一种水蛭的DNA条形码分子鉴定方法，其特征在于采用DNA条形码鉴定的水蛭为蚂蝗Whitmania pigra Whitman，亦称宽体金线蛭，其步骤主要包括：(1)从待测的水蛭组织中分离提取总DNA；(2)以该DNA为模板用一对引物，通过聚合酶链式反应扩增出水蛭COI基因；其中所述引物DNA的序列为：LCO1490：5’‑GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG‑3’；HCO2198：5’‑TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA‑3’；(3)然后取适量步骤(2)的聚合酶链式反应扩增出的COI基因产物用琼脂糖电泳分离鉴定扩增产物大小，送生物公司测序；(4)根据测序结果，进行分析比对，如果与所述基因序列SEQ ID NO.1的同源性在99％以上，即可判断所述的待测组织即为宽体金线蛭来源。