[发明专利]核酸检测方法

摘要

本发明公开了一种核酸检测方法，包括以下步骤：确定待测目标序列及其待测靶序列；根据目标序列设计合成锁式探针；制备滚环扩增引物；制备交联探针；进行连接反应，以连接产物为模板，利用扩增引物进行滚环扩增；滚环扩增完成后，用交联探针检测滚环扩增产物，若荧光信号显著增强，说明含有目标靶序列。在待测目标存在的条件，锁式探针+滚环扩增反应扩增出可被交联探针技术检测的DNA，如果不存在待测目标，交联探针技术检测不到长链产物。滚环扩增可将一个单位的待测序列扩增得到成百上千单位的重复序列，交联探针检测技术又可以从1个单位的重复序列出发得到成百上千倍的信号扩增，本发明的方法灵敏性大大增强。

主权项

一种核酸检测方法，其特征在于包括以下步骤：①确定待测目标序列及其待测靶序列；②根据目标序列设计合成锁式探针；③制备滚环扩增引物；④制备交联探针；⑤进行连接反应，将待测目标序列与锁式探针，缓冲液组成的混合液被加热到85～95℃后冷却到室温，然后加入连接酶，与连接酶混合后在20～37℃孵育0.5～4小时，加热使连接酶变性失活；⑥以连接产物为模板，利用扩增引物进行滚环扩增；⑦滚环扩增完成后，用交联探针检测滚环扩增产物，检测时，在未加入核酸酶孵育之前记录荧光值作为初始值，加入核酸酶孵育后记录荧光值作为终点值，若终点值与初始值前后差值大于阴性对照品的3倍或3倍以上，说明含有目标靶序列。