[发明专利]重组依赖的核酸滚环扩增方法在审
申请号: | 201410168939.9 | 申请日: | 2014-04-25 |
公开(公告)号: | CN103966197A | 公开(公告)日: | 2014-08-06 |
发明(设计)人: | 俞国华 | 申请(专利权)人: | 俞国华 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 200062 上海市普*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明公开了一种依赖DNA重组的核酸滚环扩增方法,整个扩增过程包括:1)设计4个可与靶序列结合的引物;2)通过具有链置换功能的DNA聚合酶的作用,产生单链DNA,该单链DNA的一端或两端含有拓扑异构酶或者位点特异性重组酶特异识别位点;3)由拓扑异构酶或位点特异性重组酶介导该单链DNA的环化;4)环状单链DNA的滚环扩增。本发明具有许多优点:比如可以简化等温扩增引物的设计、进行大片段核酸的扩增、可以在多个不同温度下实现等温核酸扩增等。 | ||
搜索关键词: | 重组 依赖 核酸 扩增 方法 | ||
【主权项】:
一种拓扑异构酶介导环化的核酸滚环扩增方法,其特征在于,整个扩增过程包括以下步骤:(1)设计4个可与靶序列结合的引物,两个为内引物(B1和F1),两个为外引物(B2和F2),其中一个内引物的5’端含有拓扑异构酶特异识别位点;(2)通过具有链置换功能的DNA聚合酶的作用,产生单链DNA,该单链DNA的一端含有拓扑异构酶特异识别位点;(3)由拓扑异构酶介导该单链DNA的环化;(4)环状单链DNA的滚环扩增。
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