[发明专利]一种从鳀鱼中分离的活性多肽

摘要

本发明的目的是提供一种从鳀鱼发酵液中分离的活性多肽，本发明得到的抗神经细胞损伤多肽分子量为2,181Da；由天门冬氨酸、苏氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸等十一种氨基酸组成，是一种新型的具有活性活性的多肽。本发明获得的多肽在谷氨酸盐对神经细胞损伤模型中，本发明的活性多肽的加入可以显著提高PC12神经细胞的存活率，在终浓度为50μg/mL时，细胞存活率与损伤组比较提高了26.4％，有效地减轻了谷氨酸盐诱导的神经细胞损伤。另外，对其神经细胞保护作用的细胞机理研究发现，活性多肽的加入显著增加了胞内的总抗氧化能力，且对SOD活力的增加有一定促进作用。

主权项

一种活性多肽，其特征在于，所述的活性多肽的制备方法包括如下的步骤：1)将鳀鱼浓缩液加入2～6倍体积的水后，再加入鳀鱼浓缩液重量1～8％的蛋白酶，在40～70℃下酶解2～24h制成酶解液；2)在步骤1)的酶解液中加入鳀鱼酶解液重量1％～10％的麸皮，灭菌后接入米曲霉发酵3～7d获得发酵液；3)将步骤2)制备的发酵液过滤，滤液灭菌后得到鳀鱼发酵母液成品；4)将步骤3)得到的鳀鱼发酵母液成品进行冷冻干燥成干粉后，再用超纯水溶解，溶解液通过滤膜过滤后，滤液用葡聚糖G‑15进行分离，上样量为0.2～2mL，以蒸馏水为洗脱液，流速为0.2～2mL/min，检测波长为220nm，分管收集洗脱27～30min的洗脱液；5)将步骤4)得到的洗脱液浓缩后用DEAE‑Sepharose FF离子交换柱层析进行分离纯化：浓缩后的样品上pH7.5～8.5的5mM Tris‑HCl缓冲液平衡的DEAE‑Sepharose FF离子交换柱，采用浓度为2mol/L NaCl梯度洗脱，流速为0.2～2mL/min，检测波长为220nm，分管收集洗脱3～6min的洗脱液；6)将步骤5)得到的洗脱液组份过SB‑C₁₈半制备柱，柱温25℃，上样量20～100μL，紫外波长220nm，流速0.5～2mL/min，流动相A为乙腈，流动相B中含0.1～1％的三氟乙酸；分管收集12～13.5min的洗脱液，干燥后即为活性多肽。