[发明专利]酵母重组表达门冬胰岛素的制备方法有效
| 申请号： | 201410181346.6 | 申请日： | 2014-05-04 |
| 公开（公告）号： | CN105087724B | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 冯一建;范开;何勇 | 申请（专利权）人： | 重庆派金生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K14/62;C12P21/06;C12R1/84;C12R1/865 |
| 代理公司： | 50213 重庆中之信知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 张景根<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 400700 *** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 酵母重组表达门冬胰岛素的制备方法。本发明公开了一种毕赤酵母重组表达门冬胰岛素的制备方法。具体包括在酵母中高效分泌表达重组人门冬胰岛素原、赖氨酰内肽酶单一酶切获得缺失B30的门冬胰岛素、偶联苏氨酸酯、脱保护、反相纯化及结晶的工艺过程。本发明方法更适合重组门冬胰岛素工业化制备。 | ||
| 搜索关键词： | 酵母 重组 表达 胰岛素 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种门冬胰岛素在酵母中重组表达及制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：/n(1)通过酵母发酵获得正确构象的重组门冬胰岛素原；/n(2)金属螯合层析和阳离子交换层析纯化门冬胰岛素原；/n(3)赖氨酰内肽酶单一酶切制备缺失B30位苏氨酸的门冬胰岛素；/n(4)缺失B30位苏氨酸的门冬胰岛素偶联苏氨酸酯及脱保护；/n(5)门冬胰岛素的反相精纯化及结晶；/n所述重组门冬胰岛素原的氨基酸序列为：/nEEAEAEAEPKFVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTDKXaaWKGIVE QCCTSICSLYQLENYCN/n其中，序列第1位至10位为引导肽，11-39为B链肽段，40-42为短C肽肽段，43-63为A链肽段，Xaa为Met或Glu。/n
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