[发明专利]一种安全快速鉴定食品中猪源性成分的检测方法及其试剂盒

摘要

本发明公开了一种安全快速鉴定食品中猪源性成分的检测方法及其试剂盒，检测方法包括设计猪特异性引物、模板DNA提取、PCR扩增引物及反应体系制备、PCR扩增以及扩增产物检测等步骤，所述试剂盒包括特异性引物探针、DNA提取试剂、PCR反应体系混合液以及琼脂糖粉等成分；本发明的优点在于：结果准确、灵明度高，能快速检测食品中所含的猪肉成分，不但杜绝了以猪肉冒充牛、羊肉、以假充真、掺杂使假的违法行为，也对新疆、宁夏和其周边的中亚地区等少数民族聚居区清真食品的食用安全提供了保障，也为我国社会的稳定提供了可靠的技术支持。

主权项

一种安全快速鉴定食品中猪源性成分的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）设计引物：设计只能扩增猪线粒体DNA的猪特异性引物，所述特异性引物包括上游引物和下游引物两种，其序列如下：上游引物F：5‑ATGAAACATTGGAGTAGTCCTACTATTTACC‑3；下游引物R：5‑CTACGAGGTCTGTTCCGATATAAGG‑3；（2）模板DNA提取：采用酚‑氯仿法提取模板DNA，并于质量分数0.8%的琼脂糖电泳进行检测，提取的模板DNA于‑20℃备存；（3）PCR 扩增引物及反应体系：反应总体系25uL，包括12.5uL的PCR Mix，2.5pmol/L的步骤（1）制备的上游引物和下游引物各1μL，步骤（2）提取的模板DNA 50～100ng，水补余；（4）PCR 扩增：在步骤（3）的条件下，依次进行预变性95℃、4min，变性94℃、45s，退火、猪特异性引物60℃、30s，延伸72℃、60s，连续进行35个循环，最后延伸72℃、7min，得到模板DNA即mtDNA的16S rRNA 基因片段；（5）扩增产物检测：将步骤（4）猪特异性引物扩增mtDNA得到的16S rRNA 基因片段，用质量分数1.5%的琼脂糖电泳检测，将扩增后得到的基因片段进行序列测定，并根据测序结果进行同源性匹配判断。