[发明专利]一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法在审
申请号: | 201410212525.1 | 申请日: | 2014-05-20 |
公开(公告)号: | CN104087653A | 公开(公告)日: | 2014-10-08 |
发明(设计)人: | 陈丽静;杨妮娜;孙少坤;马镝;孙红梅;苏瑛;郭志富;马慧 | 申请(专利权)人: | 沈阳农业大学 |
主分类号: | C12Q1/18 | 分类号: | C12Q1/18;C12R1/645 |
代理公司: | 沈阳科威专利代理有限责任公司 21101 | 代理人: | 杨滨 |
地址: | 110161 辽*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | 一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法,其方法是:先通过培养容器采用马铃薯燕麦淀粉培养基培养百合灰霉病菌,经灭菌锅灭菌,静置放凉为培养基配制;待测百合的采集:取现蕾初期的健康且无百合灰霉病病原菌感染的百合株苗,其上须有6-9片健康叶片,分别从上中下三个部位取完整百合叶片;病原菌采集:取百合典型感病叶片,分离纯化病原菌,经鉴定是灰霉菌后,在马铃薯燕麦淀粉培养基上培养7d,接种健康的百合叶片;采用菌丝块接种法、孢子液喷雾接种法或摩擦接种法接种;接种好病原菌的百合叶片叶柄伤口处用湿润的棉花包裹,将接种好的百合叶片置于培养皿中,喷洒适量无菌水进行保湿培养;然后分别于3、5、7、9d调查叶片发病情况观察鉴定。本发明实现了在可控条件下准确高效地鉴定不同百合品种对百合灰霉病的抗性。 | ||
搜索关键词: | 一种 快速 人工 接种 鉴定 百合 灰霉病 抗性 方法 | ||
【主权项】:
一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法,其特征在于:A.培养容器准备:采用平板培养皿作为离体培养容器,在培养皿中放置滤纸2‑3张;B.培养基配制:采用马铃薯燕麦淀粉培养基培养百合灰霉病菌,高压灭菌锅121‑125℃灭菌25分钟,超净工作台上将灭菌后的培养基分装到平板培养皿中,静置放凉;C.待测百合的采集:选取现蕾初期的健康且无百合灰霉病病原菌感染的百合株苗,其上须有6‑9片健康叶片,分别从上、中、下3个部位剪取完整的百合叶片;D.病原菌采集:取百合典型感病叶片,分离纯化病原菌,经鉴定是灰霉菌后,在马铃薯燕麦淀粉培养基上培养7d,用于接种健康的百合叶片;E.接种方法:采用以下的菌丝块接种法,孢子液喷雾接种法或摩擦接种法来接种百合灰霉病原菌;所述菌丝块接种法:用直径为0.5cm的打孔器将在马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉菌打成菌丝块,将其接种于待测百合叶片;所述孢子液喷雾接种法:用无菌水将在马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉菌孢子洗出,并调成浓度为1×105~5×105 cfu/mL的菌悬液,喷雾接种于待测百合叶片;所述摩擦接种法:挑取马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉病原菌与适量石英砂及无菌水混合均匀,用无菌的小指形管沾取调制好的孢子叶,避开主叶脉涂抹于待测叶片上,摩擦数次至形成细小的伤口;F.培养:接种好病原菌的百合叶片叶柄伤口处用湿润的棉花包裹,将接种好的百合叶片置于培养皿中,喷洒适量无菌水,于25℃(常温)条件下保湿培养;G.观察鉴定:分别于3、5、7、9d调查叶片发病情况。
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