[发明专利]一种固定化磷脂酶D催化制备磷脂酰丝氨酸的方法

摘要

本发明公开了一种固定化磷脂酶D催化制备磷脂酰丝氨酸的方法，该方法包括如下步骤(1)以甲壳素为载体，以戊二醛为交联试剂，固定游离磷脂酶D得到磷脂酶D的固定化酶；(2)以步骤(1)制备得到的磷脂酶D的固定化酶为催化剂，以醋酸丁酯为有机相溶剂，以pH5.5、50mM的醋酸钠缓冲液为水相溶剂，在温度20～60℃条件下，L‑丝氨酸与大豆磷脂按摩尔比10～1001反应制备磷脂酰丝氨酸，反应结束后过滤回收磷脂酶D重复使用。本发明方法在双相催化体系中转酯率达到78％，固定化酶可以重复利用。方法简单，易于操作，制备成本低廉。

主权项

一种固定化磷脂酶D催化制备磷脂酰丝氨酸的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)以甲壳素为载体，以戊二醛为交联试剂，固定游离磷脂酶D得到磷脂酶D的固定化酶；(2)以步骤(1)制备得到的磷脂酶D的固定化酶为催化剂，以醋酸丁酯为有机相溶剂，以pH 5.5、50mM的醋酸钠缓冲液为水相溶剂，在温度20～60℃、CaCl2存在条件下，L‑丝氨酸与大豆磷脂按摩尔比10～100:1反应制备磷脂酰丝氨酸，反应结束后过滤回收磷脂酶D重复使用；步骤(1)中，以甲壳素为载体，以戊二醛为交联试剂，固定游离磷脂酶D得到磷脂酶D的固定化酶的方法包括如下步骤：(1a)游离磷脂酶D的制备：Streptomyces racemochromogenes ATCC23954甘油菌经种子培养和发酵培养后得到含有磷脂酶D的发酵液，发酵液过滤除去菌体，收集清液，再经超滤处理得游离磷脂酶D酶液；(1b)甲壳素的交联：以甲壳素为载体，加入交联试剂戊二醛溶液，室温下浸泡并搅拌1‑5h，静置过夜，离心去除上清液，离心后的载体用蒸馏水反复冲洗以除去残余的戊二醛，抽滤，即得交联甲壳素载体；(1c)游离磷脂酶D的固定化：在交联甲壳素载体中，加入游离磷脂酶D酶液和醋酸钠缓冲溶液，30℃下搅拌或者震荡吸附2～6h，取出过滤，并用醋酸钠缓冲液冲洗，置于4℃下保存。