[发明专利]高分子量的夏枯草多糖及其制备方法与在免疫药物中的应用

摘要

本发明公开高分子量的夏枯草多糖及其制备方法与在免疫药物中的应用。该方法将夏枯草粉与蒸馏水配成固液比为1:15～1:35，置于超声场下，功率100～300W，频率15～50KHz，时间10～30min，温度25～40℃，然后物料泵入高压场下，压力100～500MPa，温度100～130℃，时间10～30min；过滤，浓缩，脱蛋白，脱色，醇沉，冷冻干燥得粗多糖，经柱层析纯化得夏枯草多糖。本发明方法具有多糖产率高，分子量为1000～4000K道尔顿，是高分子量杂多糖，能够显著刺激小鼠巨噬细胞RAW246.7分泌免疫因子，且对人体正常细胞基本无细胞毒性，同时具有抗癌活性，可开发无副作用的免疫药物或保健品。

主权项

一种高分子量的夏枯草多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将夏枯草果穗干燥后，粉碎，过筛，加入乙醇加热回流，脱色和除去小分子醇溶性物质，过滤处理得残留物，残留物重复加入乙醇加热回流2～3次，在45～60℃的鼓风干燥箱中干燥24～48h；(2)将步骤(1)处理所得的夏枯草样品与蒸馏水配成固液比为1:15～1:35，置于超声场条件下，超声输出功率为100～300W，频率为15～50KHz，处理时间10～30min，温度25～40℃；然后将物料泵入高压场中，压力为100～500MPa，温度为100～130℃，时间10～30min，然后5～10s内减压到标准大气压，将物料泵回超声场中进行超声处理后，再进行高压处理，循环周期为3～5次；所述循环周期是指物料先超声处理再进行高压处理的一次循环过程；离心分离得提取液，离心力4500～10000g，时间5～10min，在45～65℃下减压浓缩到原体积的1/5～1/10，得多糖浓缩液；(3)在多糖浓缩液中加入Sevag试剂，多糖浓缩液与Sevag试剂的体积比为3:1～6:1，振荡20～30min，离心分离糖液，离心力4500～10000g，离心时间5～10min，重复进行10～20次；(4)将(3)中脱蛋白后的多糖浓缩液加入到大孔树脂，进行静态吸附，浓缩液与大孔树脂的体积比为5:1～2:1，温度35～50℃，时间4～6h，过滤得滤液；(5)在(4)中滤液中加入无水乙醇，边搅拌边加入，使乙醇体积浓度达到65～85％，4～5℃冷藏室中静置12～24h，离心得沉淀的多糖，离心力4500～10000g，时间10～15min，冷冻干燥得夏枯草粗多糖；(6)将夏枯草粗多糖溶于蒸馏水，配制浓度为20～30mg/mL的多糖溶液，上样于DEAE‐Sepharose柱，上样量体积与柱体积的比为1:3～1:5，用蒸馏水进行洗脱，流速0.5～2mL/min，分管收集，每管5～10mL，苯酚硫酸法检测多糖，将糖反应阳性收集液合并，45～65℃下减压浓缩，冷冻干燥得纯化的夏枯草多糖；所述阳性收集液为1/2最大吸光值范围的收集液。