[发明专利]一种制备异种脱细胞基质的方法及其产品

摘要

本发明涉及到一种制备脱细胞真皮基质敷料的方法，将动物皮通过制备断层皮片﹑分离表皮和真皮﹑交联﹑脱细胞﹑冷冻干燥﹑病毒灭活后最终得到脱细胞真皮基质。本发明的优点本方法用N,N‑二环己基碳化二亚胺进行交联时间短﹑效率高，另交联前提，极大简化了后面交联剂残留处理程序，节省了成本；脱细胞过程中利用酶﹑SDS和碱联合，对脱细胞基质进行微观调控，利用冷冻干燥对脱细胞基质进行宏观调控，脱细胞彻底，细胞更容易在其上生长。

主权项

一种制备异种脱细胞基质的方法，其特征在于：其具体包括如下步骤：(1) 制备断层皮片用取皮机将动物皮肤制成0.1‑2.0mm厚的断层皮片，经洗涤，去脂，再用磷酸盐缓冲液（PBS液）洗涤；(2) 分离表皮和真皮将步骤(1)得到的断层皮片用0.1%‑0.5%的胰蛋白酶‑PBS液在4℃‑20℃下，浸泡6‑24h；(3) 交联将步骤(2)处理后的材料用含有N,N‑二环己基碳化二亚胺、N‑羟基丁二酰亚胺(NHS)和一水吗啉乙磺酸（MES）的乙醇水溶液浸泡3‑12h；(4) 脱细胞将步骤(3)处理后的材料用1‑2%的氢氧化钠溶液处理8‑24h，然后用0.1%‑0.5%的胰蛋白酶‑PBS液在4℃‑20℃处理20‑36h，PBS冲洗，以0.2%‑0.5% 十二烷基磺酸钠(SDS)对基质进行震荡洗涤，100‑200转/分钟，温度20℃‑30℃，每隔1小时更换SDS液，3‑5h取出，PBS冲洗；(5) 冷冻干燥‑100‑‑60℃预冷冻3‑5小时，在冷冻干燥机做8‑15小时真空冷冻干燥；(6) 病毒灭活经Co‑60所产生的射线辐照消毒灭菌，即得成品；所述含有N,N‑二环己基碳化二亚胺、N‑羟基丁二酰亚胺(NHS)和一水吗啉乙磺酸（MES）的乙醇水溶液的配制方法如下：向乙醇水溶液,加入一水吗啉乙磺酸（MES）使其浓度达到0.06mol/L，再向上述溶液中加入N,N‑二环己基碳化二亚胺（DCC）和N‑羟基丁二酰亚胺(NHS),按质量比为每克步骤(2)处理后的材料对应1.8‑5.4克N,N‑二环己基碳化二亚胺和0.415‑1.245克NHS。