[发明专利]一种富含咖啡酰熊果苷的樟叶越桔的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种富含咖啡酰熊果苷的樟叶越桔的组织培养方法，属于植物组织培养技术领域。在不同的激素及活性炭配比浓度下，以改良WPM为基本培养基，樟叶越桔幼嫩茎段为外植体进行组培苗培养系的建立及咖啡酰熊果苷含量的测定。只需通过调节6-BA与NAA及活性炭的配比就可以控制无菌苗的生长及生根诱导。外植体诱导率达97％，芽苗健壮，生长快，芽苗生根率达94％，且根系健壮。具有繁殖速度快、周期短、咖啡酰熊果苷含量高等优点，是大量获取咖啡酰熊果苷的有效途径，并为樟叶越桔优良快繁苗的规模化生产提供可靠的技术依据。

主权项

一种富含咖啡酰熊果苷的樟叶越桔的组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：(1)从叶越桔植株上获取当年生的樟叶越桔茎段作为外植体，外植体剪除叶片剪成4～6cm长的茎段，用洗洁精水浸泡30～60min，流水冲洗1～2h后再用酒精和升汞消毒，消毒后用无菌水冲洗，无菌条件下切成带1～2个叶腋的茎段，然后叶腋朝上斜插于腋芽诱导培养基上进行培养，叶腋处诱导出腋芽后继续培养；所述的腋芽诱导培养基为：WMP+6‑BA1.0～3.0mg/L+NAA0.5～1.5mg/L+活性炭2.0～3.0g/L，pH5.4～5.8；(2)腋芽的增殖诱导：待腋芽长成3cm以上的小苗后，将其切成1.5～2cm长带1～3个叶腋的茎段，然后叶腋朝上斜插于腋芽增殖培养基中进行培养；培养至小苗长至3～4cm高且叶腋处可诱导出新的不定芽小苗即得到樟叶越桔组培苗；所述的腋芽增殖培养基为：WMP+6‑BA1.0～3.0mg/L+NAA0.2～1.0mg/L+活性炭1.0～2.0g/L，pH5.4～5.8；(3)樟叶越桔组培苗的生根诱导：将樟叶越桔组培苗接种于生根培养基中培养诱导生根得到樟叶越桔生根苗；所述的生根培养基为：WMP+6‑BA0.5～1.5mg/L+NAA0.1～1.0mg/L+活性炭0.1～1.0g/L，pH5.4～5.8。