[发明专利]一种基于Taq酶末端转移酶活性构建T载体的方法有效
| 申请号： | 201410231232.8 | 申请日： | 2014-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN103981200B | 公开（公告）日： | 2017-07-14 |
| 发明（设计）人： | 吕新;李玥仁;陈丽华;刘兰英;李巍 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院中心实验室 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/64 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350003 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程领域中一种载体构建的方法，具体为一种基于TaqDNA聚合酶的末端转移酶活性构建T载体的方法。主要利用Taq DNA聚合酶末端转移酶活性在线性化平末端出发载体的3′‑端添加T，然后利用T4 DNA连接酶去除3′‑端未加T载体自身环化背景，获得3′‑端具有单个T突出的线性T载体。本发明获得的T载体质量稳定，自身环化背景低，克隆效果好，不但适用于小规模制备，也适用于大规模生产，将在基因工程领域发挥重要作用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 taq 末端 转移酶 活性 构建 载体 方法 | ||
【主权项】：
一种基于TaqDNA聚合酶末端转移酶活性构建T载体的方法，其特征在于：所述方法的步骤包括：1）利用平末端内切酶酶切出发载体，回收获得线性化平末端载体；2）利用TaqDNA聚合酶的末端转移酶活性，在二价金属阳离子的作用下给线性化平末端载体加T，回收获得中间T载体；3）利用T4DNA连接酶连接步骤2）所得中间T载体，去除3′‑端未加T载体，回收获得T载体；所述的平末端内切酶为EcoRV、SmaI、ScaI中任意一种；所述出发载体为pBluescriptSK(+)、pUC18、PGEM‑7Zf(+)中任意一种；所述的出发载体加入量与平末端内切酶酶量比例为:1ug出发载体，加入10U的平末端内切酶酶量；所述二价金属阳离子为CdCl2，所述CdCl2的浓度为1mM。
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