[发明专利]一种利用水蓼促进酿酒酵母分泌表达人β防御素3的方法

摘要

本发明公开一种利用水蓼促进酿酒酵母分泌表达人β防御素3的方法。该方法包括如下步骤制备重组酿酒酵母INVSC1/pYα‑hBD‑3的种子液体；将种子液体接种于水蓼生长培养基中培养，收集菌体；在将菌体接种于水蓼诱导培养基中培养，收集上清液；然后进行抑菌试验，以抑菌圈直径的大小表示抑菌效果。本发明提供了一种新颖、低成本、高分泌量的生长培养基和诱导培养基，提高了重组酿酒酵母INVSC1/pYα‑hBD‑3分泌表达人β防御素3的能力。本发明的生长及诱导培养基中的碳氮比的搭配对酿酒酵母的生长和蛋白分泌表达非常有利，明显优于现有的培养方法，为重组酿酒酵母的工业化和产业化奠定更坚实的基础。

主权项

一种利用水蓼促进酿酒酵母分泌表达人β防御素3的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将重组酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)INVSC1/pYα‑hBD‑3菌种划线于YPD培养基平板中，于28～30℃培养2～3d至长出单菌落；挑取单菌落划线接种于YPD培养基平板上，于28～30℃培养1～2d，再挑取单菌落接种于YPD液体培养基中，28～30℃、180～250r/min培养过夜，得到种子液体；(2)取步骤(1)制备的种子液体接种于水蓼生长培养基中，28～30℃、180～250r/min振摇培养，培养24～36h至OD600为1～4时停止生长培养，得到培养液；(3)取步骤(2)中得到的培养液低速离心，弃上清液，用无菌水清洗两遍，低速离心，弃上清液，得到重组酿酒酵母生长培养菌体；(4)将步骤(3)所得的重组酿酒酵母生长培养菌体转接至水蓼诱导培养基，28～30℃、180～250r/min振摇培养，培养48～72h，收集诱导培养液；步骤(2)所述的水蓼生长培养基通过如下步骤制备：50～90g/L葡萄糖，6.7g/L YNB，腺嘌呤、精氨酸、半胱氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苏氨酸和色氨酸各0.1g/L，天门冬氨酸、组氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸和缬氨酸各0.05g/L，20～40g/L蛋白胨，20～60g/L水蓼；121℃高压灭菌20min后备用；步骤(4)所述的水蓼诱导培养基通过如下步骤制备：20～40g/L葡萄糖，6.7g/L YNB，腺嘌呤、精氨酸、半胱氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苏氨酸和色氨酸各0.1g/L，天门冬氨酸、组氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸和缬氨酸各0.05g/L，30～50g/L蔗糖，20～40g/L酵母浸膏，20～60g/L水蓼；121℃高压灭菌20min后备用。