[发明专利]一种用细胞系生产鸡马立克氏病活疫苗的方法

摘要

本发明公开了一种用细胞系生产鸡马立克氏病活疫苗的方法，步骤为：A、选择细胞系作为制苗用细胞；B、制苗用细胞的传代与培养；C、细胞毒种的繁殖；D、制苗毒液的繁殖；E、配苗、分装、冻干或置液氮中冻存。本发明能够解决现有技术的不足，具有生产工艺稳定、易操作，病毒含量高，批间差异小，质量易控，可显著提高疫苗产量与质量。利用本发明生产的鸡马立克氏病活疫苗安全性好、免疫效力高，对鸡马立克氏病强毒株、超强毒株的攻击具有完全的免疫保护作用。

主权项

一种用细胞系生产鸡马立克氏病活疫苗的方法，其特征在于步骤如下：A、选择细胞系作为制苗用细胞；B、制苗用细胞的传代与培养上述细胞系经EDTA‑胰酶细胞分散液消化传代，以细胞生长液继续培养，形成单层时，用于继续传代或接种病毒；C、细胞毒种的繁殖用种毒稀释液，将鸡马立克氏病活疫苗毒种稀释成一定浓度，接种生长良好的制苗用细胞系或鸡胚成纤维细胞单层上，36.5‑37.5℃吸附1小时，再加入维持液或二次细胞悬液，继续培养，当70%及以上单层细胞出现典型马立克氏病细胞病变时，以EDTA‑胰酶细胞分散液消化并分散细胞，收获的细胞悬液用作制苗用毒种；D、制苗毒液的繁殖将鸡马立克氏病活疫苗制苗用毒种用维持液稀释，接种于已形成单层的细胞系单层上继续培养，当70%及以上单层细胞出现典型马立克氏病细胞病变时，收获感染细胞；E、配苗、分装、冻干或置液氮中冻存将收获的感染细胞，加冻干保护剂和抗生素，定量分装后经冷冻真空干燥为成品；或加冻存保护液和抗生素，混匀后定量分装为成品，置液氮中冻存。