[发明专利]一种评估NKT细胞对肝实质细胞杀伤能力的方法

摘要

本发明涉及医学检测技术，旨在提供一种评估NKT细胞对肝实质细胞杀伤能力的方法。该方法具体包括：取小鼠的肝脏和脾脏，各自研磨过滤后去除杂质，并分别制成肝淋巴细胞悬液和脾淋巴细胞悬液后，分别通过流式细胞分选技术分选NKT细胞悬液、树突细胞；将小鼠肝实质细胞株TLR2加入培养板，并染CFSE-FITC染料；经处理的NKT细胞悬液与细胞悬液混合后加入培养板；培养4小时后收集细胞，于细胞混合液中加入PI染色，上机检测；如果存在CFSE+细胞中PI阳性比例大于5％的情况，则说明NKT细胞对肝实质细胞杀伤能力处于过度杀伤水平。本发明能够稳定且安全地测定不同状态下的NKT细胞对肝实质细胞的杀伤效果，为以后实验室科学研究提供技术支持。

主权项

一种评估NKT细胞对肝实质细胞杀伤能力的方法，其特征在于，是通过流式细胞仪检测肝实质细胞的死亡率来评估肝脏NKT细胞对肝实质细胞的杀伤能力，具体包括：(1)取小鼠肝实质细胞株TLR2进行复苏处理，传一代后备用；(2)取C57/B6品系野生型健康小鼠的肝脏和脾脏，各自研磨过滤后去除杂质，并分别制成肝淋巴细胞悬液和脾淋巴细胞悬液；(3)通过流式细胞分选技术从肝淋巴细胞悬液中分选出肝脏的NKT细胞，制成NKT细胞悬液，并加入10ul的IL‑2活化培养；(4)通过流式细胞分选技术从脾淋巴细胞悬液分选出脾脏的树突细胞，制成树突细胞悬液；加入2ul的α‑GalCer刺激活化，然后置于射线之下照射使树突细胞失活变性后，制成细胞悬液；(5)将步骤(1)中小鼠肝实质细胞株TLR2加入培养板，并染CFSE‑FITC染料；将步骤(3)中经处理的NKT细胞悬液与步骤(4)中细胞悬液混合后加入步骤(1)中的培养板；培养4小时后收集细胞，于细胞混合液中加入PI染色，上机检测；如果存在CFSE⁺细胞中PI阳性比例大于5％的情况，则说明NKT细胞对肝实质细胞杀伤能力处于过度杀伤水平。