[发明专利]一种基于荧光定量PCR检测CYP2A6全基因缺失的方法

摘要

本发明提供一种基于荧光定量PCR检测CYP2A6全基因缺失的方法，用于非疾病诊断目的。通过分别设计针对于CYP2A6基因和ALB基因的高特异性引物，利用荧光定量PCR技术来快速准确检测CYP2A6全基因缺失的方法。其中，针对CYP2A6的引物探针组合为:Fp:5’-TCCCACCCTACTCCCTCTCTC-3’；Rp:5’-GGAGGTGAACGCGGGA-3’；Probe:5’-FAM-TGGAGACAGGCCAGGGGGCG-BHQ2-3’。

主权项

一种基于荧光定量PCR检测CYP2A6全基因缺失的方法，用于非疾病诊断目的，包括以下环节：(1)基因特异性引物的设计:针对CYP2A6基因设计的序列特异性引物探针组合，序列如下:上游引物:5’‑TCCCACCCTACTCCCTCTCTC‑3’下游引物:5’‑GGAGGTGAACGCGGGA‑3’探针:5’‑FAM‑TGGAGACAGGCCAGGGGGCG‑BHQ2‑3’针对ALB基因设计的序列特异性引物探针组合，序列如下:上游引物:5’‑TGTTGCATGAGAAAACGCCA‑3’下游引物:5’‑GTCGCCTGTTCACCAAGGAT‑3’探针:5’‑HEX‑AGTGACAGAGTCACCAAATGCTGCACA‑BHQ2‑3’其中，FAM为6‑carboxyfluorescein；HEX为6‑carboxy‑hexachlorofluorescein；BHQ2为Black Hole Quencher‑2；(2)模板的制备:提取待测样本的基因组DNA；(3)实时定量PCR:以反应体系总量20μL计，在同一个反应体系中，加入CYP2A6基因特异性上游引物250nM‑500nM、下游引物250nM‑500nM、探针100nM‑200nM、以及ALB基因特异性上游引物250nM‑500nM、下游引物250nM‑500nM、探针100nM‑200nM、2×Mastermix10μL、待测样本的基因组DNA10‑50ng，H₂O补足体积20μL；(4)结果判定:将配制好的反应体系在荧光实时定量PCR仪上进行扩增，根据仪器给出的两基因的扩增指标进行结果判定。