[发明专利]一种基于适体识别作用电化学测定多巴胺的方法

摘要

本发明涉及一种基于适体识别作用电化学测定多巴胺的方法及应用，将电化学标记物硫堇吸附在金-铂纳米粒子(Au@PtNPs)表面，再将巯基DNA1固定在Au@PtNPs表面，得电化学探针(DNA1/Th/Au@PtNPs)；再将电化学探针溶液中加入多巴胺适体链DNA2，DNA1与DNA2发生互补配对，得DNA2修饰的电化学探针(DNA2/DNA1/Th/Au@PtNPs)；当向DNA2修饰的探针溶液中加入多巴胺后，适体链DNA2与多巴胺结合，导致重新生成了电化学探针DNA1/Th/Au@PtNPs；然后将碳纳米粒子修饰金电极(CNPs/GE)浸入重新生成的电化学探针DNA1/Th/Au@PtNPs溶液中，由于碳纳米粒子与单链DNA1的吸附作用，电化学探针吸附于电极表面，测电化学信号，通过电化学信号强弱实现了电化学方法对多巴胺的定量测定。本发明的传感器具有很高的选择性和检测灵敏度。

主权项

一种基于适体识别作用电化学测定多巴胺的方法，包括如下步骤： (1)取2mL的离心管，加入1～30μL10^‑5M的DNA1和10μL pH5.2的500mM的醋酸缓冲溶液，和10μL10mM的三(2‑羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)反应1h，用以活化巯基；然后，另取2mL离心管依次加入直径15nm，1mL的Au@PtNPs和100μL10^‑4M的硫堇溶液反应0.5h，使硫堇吸附在金‑铂纳米粒子上；将吸附了硫堇的Au@PtNPs加入到活化好的巯基DNA1中，放入37℃摇床轻摇反应8～32h；使巯基DNA1与Au@PtNPs连接起来；再向体系中加入0.1M NaCl放置24h后在15000转速下，离心30min，得到红色沉淀，并用10mMpH8.0的磷酸缓冲溶液洗涤三次，分散在10mM，pH8.0的磷酸缓冲溶液中得到DNA1/Th/Au@PtNPs电化学探针； (2)用NaCO₃将CNPs调节pH至7.0，移至2mL离心管在15000转速下离心10min；离心产物用0.01M，pH7.0磷酸缓冲溶液洗涤3次；将产物用0.01M，pH7.0的磷酸缓冲溶液分散，取10μL滴在金电极表面得碳纳米粒子修饰金电极(CNPs/GE)； (3)取5～40μL10^‑5M的DNA2加入电化学探针(DNA1/Th/Au@PtNPs)溶液中，反应0.5～4h后，14000转速下离心30min，用10mM，pH8.0磷酸缓冲溶液洗涤三次，再用1mL磷酸缓冲溶液分散；在2mL离心管中加入20μL上述溶液，再加入2～20μL一定浓度的多巴胺，反应30min后将碳纳米粒子修饰金电极插入反应10～60min，用磷酸缓冲溶液冲洗后测定电化学信号； 所述的DNA1的部分序列为：5’‑GTG TTC TCT GGC GCA CAC AGA GAC ACA GAA TGA GGC CC‑HS‑3’； 所述的DNA2的部分序列为：5’‑GTC TCT GTG TGC GCC AGA GAA CAC TGG GGC AGA TAT GGG CCA GCA CAG AAT GAG GCC C‑3’。