[发明专利]一种构建高产5‑氨基乙酰丙酸大肠杆菌工程菌株的方法

摘要

本发明公开了一种构建高产5‑氨基乙酰丙酸大肠杆菌工程菌株的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明在使用载体pACYCDuet‑1过量表达5‑氨基乙酰丙酸C5合成途径关键酶谷氨酰‑tRNA还原酶和谷氨醛氨基转移酶的基础上，将来源于大肠杆菌血红素生物合成途径中的尿卟啉原III合酶(uroporphyrinogen III synthase,UROS,hemD编码)及粪卟啉原III氧化酶(coproporphyrinogen III oxidase,CPO,hemF编码)，使用pCDFDuet‑1单独表达或共表达两个酶基因，构建重组菌株。通过发酵验证，单独表达hemD或hemF以及共表达hemD和hemF，ALA产量均明显提高。

主权项

一种高产5‑氨基乙酰丙酸的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，在串联表达C5途径基因hemL和hemA的基础上，再串联表达编码尿卟啉原III合酶的基因hemD和粪卟啉原III氧化酶的基因hemF；所述hemL的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，hemA的核苷酸序列如SEQID NO.2所示；所述hemD的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述hemF的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主。