[发明专利]鳜鱼弹状病毒的检测试剂盒及检测方法有效
| 申请号： | 201410315460.3 | 申请日： | 2014-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN104032038A | 公开（公告）日： | 2014-09-10 |
| 发明（设计）人： | 雷燕;张会军;刘婉;王惠儒;张文文 | 申请（专利权）人： | 广州金水动物保健品有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
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| 地址： | 510510 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于水产动物病原的检测与诊断技术领域，本发明公开了鳜鱼弹状病毒的检测试剂盒及检测方法，本发明所述的鳜鱼弹状病毒逆转录-聚合酶链式反应快速检测试剂盒，包括：5×逆转录缓冲液；逆转录酶；随机引物；2×反应混合缓冲液1.0mL；优选设计的上、下游引物；Taq DNA聚合酶；阳性对照液；阴性对照液；ddH2O；本发明克服了现有鳜鱼弹状病毒检测方法的不足，提供一种新型逆转录-聚合酶链式反应快速检测试剂盒及检测方法，本发明对鳜鱼弹状病毒临床诊断不仅切实可行，且具有快速、准确、特异的优点，满足了临床诊断的要求，为检测鳜鱼弹状病毒提供了便利条件。 | ||
| 搜索关键词： | 鳜鱼 弹状病毒 检测 试剂盒 方法 | ||
【主权项】：
鳜鱼弹状病毒的逆转录‑聚合酶链式反应检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括： (1)5×逆转录缓冲液100μL； (2)逆转录酶25μL； (3)随机引物25μL； (4)2×聚合酶链式反应混合缓冲液1.0mL，包含以下成分： ![]()
(5)检测引物的设计合成：根据GenBank中发布的鳜鱼弹状病毒的基因序列，在其保守序列设计一对特异性检测引物，上游引物P1：5’‑ATAAGGGTAGTTGAGAAGAAG‑3’，下游引物P2：5’‑CTTCTTGTTGCTCTTCTTAAA‑3’，浓度为10μM； (6)Taq酶 5U/μL； (7)灭菌的ddH2O 1.0mL； (8)阳性对照液：提取鳜鱼弹状病毒总RNA，逆转录获得cDNA，然后以cDNA为模板，以Pl、P2为引物，进行PCR扩增，将回收纯化的扩增产物连接到pMD18‑T载体，以阳性克隆的重组质粒作为阳性对照； (9)阴性对照液：以ddH2O作为阴性对照。
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