[发明专利]一种翅柄铁线蕨快速繁殖的方法

摘要

本发明涉及一种翅柄铁线蕨的繁育方法，所述的方法包括：1)外植体的选取，2)外植体消毒，3)初始诱导培养，4)愈伤组织诱导，5)增殖培养，6)生根培养，7)炼苗和移栽。采用本方法繁育翅柄铁线蕨，可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。

主权项

一种翅柄铁线蕨快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：1)外植体的选取：取2cm长的根状茎茎尖，去掉杂质及茎尖周围的绒毛等附属物；2)外植体消毒：将上述茎尖放入盛有自来水的20‑25KHz超声波清洗机中保持温度30‑35℃处理30‑45min，然后以自来水冲洗10‑20min；随后在超净工作台上以70‑75％的酒精消毒25‑35秒，0.02％升汞溶液中处理5‑7分钟，然后以无菌水冲洗4‑5遍，置于无菌培养皿备用；3)初始诱导培养：将灭菌后外植体两端各剪去2‑3mm，茎尖按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1000‑2500Lx、光周期5‑8h/d,温度25℃±2℃；培养4‑6d后将其中未污染的外植体茎尖转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12‑18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6‑BA0.1‑0.2mg/L+NAA0.01‑0.02mg/L；4)愈伤组织诱导：取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15‑20d，条件为暗培养，温度20℃±2℃；所述愈伤组织培养基为：MS+6‑BA0.5‑2.0mg/L+NAA0.02‑0.5mg/L+PVP5‑10mg/L；5)分化和增殖培养：将透明无色的愈伤组织块放入分化培养基中培养20‑25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800‑2500Lx、光周期8‑10h/d,温度25℃±2℃；所述分化和增殖培养用培养基为：WPM+6‑BA0.1‑0.5mg/L+NAA0.1‑0.5mg/L+PVP5‑10mg/L；6)生根培养：将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养15‑20d后生根，培养条件为光强1800‑2500Lx、光周期8‑10h/d,温度25℃±2℃；所述生根用培养基为：1/2MS+IBA0.1‑0.5mg/L+PVP5‑10mg/L；7)炼苗和移栽：将有生根的翅柄铁线蕨幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗5‑8d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙和蛭石基质的苗床上，保持温度20‑25℃，湿度85％‑95％，适当遮荫即可；所述的WPM培养基配方为：大量元素：硝酸铵NH4NO₃400mg/L，硫酸钾K₂SO₄900mg/L，磷酸二氢钾KH₂PO₃170mg/L，硫酸镁MgSO₄·7H₂O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl₂·2H₂O96mg/L；四水合硝酸钙Ca(NO₃)₂·4H₂O556mg/L；微量元素：硼酸H₃BO₃6.2mg/L，硫酸锰MnSO₄·4H₂O22.5mg/L，硫酸锌ZnSO₄·7H₂O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO₄·2H₂O0.25mg/L，硫酸铜CuSO₄·5H₂O0.25mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2‑EDTA37.3mg/L，硫酸亚铁FeSO4·7H₂O27.8mg/L；有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L；所述的MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO₃1900mg/L，硝酸铵NH₄NO₃1650mg/L，磷酸二氢钾KH₂PO₃170mg/L，硫酸镁MgSO4·7H₂O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl₂·2H₂O440mg/L；微量元素：碘化钾KI0.83mg/L，硼酸H₃BO₃6.2mg/L，硫酸锰MnSO4·4H₂O22.3mg/L，硫酸锌ZnSO4·7H₂O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO4·2H₂O0.25mg/L，硫酸铜CuSO4·5H₂O0.025mg/L，氯化钴CoCl₂·6H₂O0.025mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2‑EDTA37.25mg/L,硫酸亚铁FeSO4·7H₂O27.85mg/L；有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.5mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L；蔗糖30g/L，琼脂粉7g/L，pH为5.7；所述的1/2MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO₃950mg/L，硝酸铵NH₄NO₃825mg/L，磷酸二氢钾KH₂PO₃85mg/L，硫酸镁MgSO4·7H₂O185mg/L；余同上述MS培养基；所述的6‑BA为6‑苄氨基嘌呤；所述的NAA为α‑萘乙酸；所述的IBA为吲哚‑3‑丁酸；所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。