[发明专利]一种白花杜鹃组织培养的方法

摘要

本发明涉及一种白花杜鹃的组织培养方法，所述的方法包括：1)外植体的选取，2)外植体消毒，3)初始诱导培养，4)增殖培养，5)生根培养，6)炼苗和移栽。采用本方法繁育白花杜鹃，可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。

主权项

一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：1)外植体的选取：取当年生直径2‑5mm的白花杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪成2‑3cm的茎段；2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度30‑35℃处理30‑45min，然后以自来水冲洗10‑20min；随后在超净工作台上以70‑75％的酒精消毒25‑35秒，0.1％升汞溶液中处理5‑7分钟，然后以无菌水冲洗4‑5遍，置于无菌培养皿备用；3)初始诱导培养：将灭菌后外植体茎段各剪去2‑3mm，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强2500‑3000Lx、光周期10‑14h/d,温度25℃±2℃；培养6‑8d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12‑18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6‑BA0.3‑0.6mg/L+NAA0.1‑0.3mg/L；4)增殖培养：将步骤3)新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强2500‑3000Lx、光周期10h/d,温度25℃±2℃；培养20d后，至新芽长出并伸长到1cm以上；所述的培养基组成MS+6‑BA0.4‑0.6mg/L+NAA0.2‑0.5mg/L+IBA0.8‑1.2mg/L+KT0.8‑1.2mg/L。5)生根培养：将步骤4)的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强2500‑3000Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养15d后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MS+IBA0.2‑0.5mg/L+PVP5‑10mg/L；6)炼苗和移栽：将有生根的白花杜鹃幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3‑5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20‑25℃，湿度70％‑80％，适当遮荫即可；所述的MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO₃1900mg/L，硝酸铵NH₄NO₃1650mg/L，磷酸二氢钾KH₂PO₃170mg/L，硫酸镁MgSO4·7H₂O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl₂·2H₂O440mg/L；微量元素：碘化钾KI0.83mg/L，硼酸H₃BO₃6.2mg/L，硫酸锰MnSO4·4H₂O22.3mg/L，硫酸锌ZnSO4·7H₂O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO4·2H₂O0.25mg/L，硫酸铜CuSO4·5H₂O0.025mg/L，氯化钴CoCl₂·6H₂O0.025mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2‑EDTA37.25mg/L,硫酸亚铁FeSO4·7H₂O27.85mg/L；有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.5mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L；蔗糖30g/L，琼脂粉7g/L，pH为5.7；所述的1/2MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO₃950mg/L，硝酸铵NH₄NO₃825mg/L，磷酸二氢钾KH₂PO₃85mg/L，硫酸镁MgSO4·7H₂O185mg/L；余同上述MS培养基；所述的6‑BA为6‑苄氨基嘌呤；所述的NAA为α‑萘乙酸；所述的IBA为吲哚‑3‑丁酸；所述的KT为激动素；所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。