[发明专利]一种鲍铁蛋白的粗提方法有效
| 申请号： | 201410326242.X | 申请日： | 2014-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN104130321B | 公开（公告）日： | 2017-02-22 |
| 发明（设计）人： | 姜敬哲;何健;王江勇;谷露 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院南海水产研究所 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K1/14 |
| 代理公司： | 广州知友专利商标代理有限公司44104 | 代理人： | 宣国华,马赟斋 |
| 地址： | 510300 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鲍铁蛋白的粗提方法，包括以下步骤(1) 取除性腺外的鲍组织，加入SB缓冲液，匀浆，得匀浆液；(2)匀浆液置于液氮和水浴中反复冻融；(3)用SB缓冲液定容至总体积100mL，定容后的溶液混匀后冷冻离心，收集上清液；(4) 上清液经滤膜过滤，离心，弃上清，加入SB缓冲液重悬得悬液；(5) 将悬液加到CsCl密度梯度液面上，离心，弃上清，得红褐色的铁蛋白。该方法操作简便、快速且样品损失量少，提取的铁蛋白纯度较高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 铁蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 取除性腺外的鲍组织，加入SB缓冲液，匀浆，得匀浆液；(2)匀浆液置于液氮和水浴中反复冻融；(3)用SB缓冲液定容至总体积100mL，混匀后，采用高速冷冻离心机依次以转速1000~5000rpm、6000~8000rpm、9000~10000rpm和11000~14000rpm对定容后的溶液离心10~60min，收集上清液；所述SB缓冲液的pH为6.0~8.0，含有0.1~0.3M NaCl，20~100mM Tris‑HCl，1~20mM CaCl2，1~20mM MgCl2；(4) 上清液经滤膜过滤，过滤所得的上清液使用超速离心机以转速15000~40000rpm离心0.5~3h，弃上清，加入SB缓冲液重悬沉淀物得重悬液；(5) 将重悬液加到离心管中的CsCl密度梯度液的液面上，CsCl密度梯度液采用SB缓冲液配置，从离心管管底到管顶的溶液质量比分别为40~60%、30~40%、20~30%、10~20%，使用超速离心机以转速15000~40000rpm离心0.5~3h，弃上清，得红褐色的铁蛋白。
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