[发明专利]生物工程菌株及其制备方法和用途在审
| 申请号： | 201410333642.3 | 申请日： | 2014-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN104263748A | 公开（公告）日： | 2015-01-07 |
| 发明（设计）人： | 许煜泉;刘海明;周泉;周万平 | 申请（专利权）人： | 武汉汉申生物科技有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N15/78 | 分类号： | C12N15/78;C12N1/21;C12N15/01;C12N1/20;C12P17/12;C12R1/38 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 李志东 |
| 地址： | 430073 湖北省武*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了生物工程菌株及其制备方法和用途，其中制备生物工程菌株的方法包括：1)以假单胞菌株M18G基因组DNA为模板，获得第一扩增产物和第二扩增产物；2)利用重叠基因扩增技术将第一和第二扩增产物进行连接处理；3)将连接产物经EcoRI和PstI酶切后插入质粒pK18mobsacB中形成重组质粒pK18DU1；4)将重组质粒导入E.coli S17-1；5)将重组大肠杆菌与M18G进行双亲杂交交换获得M18GU；6)将重组表达质粒pBBRphzH转入M18GU，获得生物工程菌株M18GU/pBBRphzH。该菌株能高效生产吩嗪-1-甲酰胺，且发酵效价稳定，生产成本低，适宜于大规模生产。 | ||
| 搜索关键词： | 生物工程 菌株 及其 制备 方法 用途 | ||
【主权项】：
一种制备生物工程菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)以假单胞菌株M18G基因组DNA为模板，分别利用第一引物和第二引物进行第一PCR扩增获得第一扩增产物，利用第三引物和第四引物进行第二PCR扩增获得第二扩增产物，其中，所述第一扩增产物具有SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列，所述第二扩增产物具有SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列；2)利用重叠基因扩增技术，将所述第一扩增产物和所述第二扩增产物进行连接处理，以便获得连接产物，所述连接产物具有SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列；3)将所述连接产物经EcoRI和PstI酶切后，插入质粒pK18mobsacB中，形成重组质粒pK18DU1；4)将所述重组质粒导入E.coli S17‑1，以便获得重组大肠杆菌菌株；5)将所述重组大肠杆菌菌株与所述假单胞菌株M18G进行双亲杂交交换，以便获得假单胞菌株M18GU；6)将携带phzH基因的重组表达质粒pBBRphzH转入所述假单胞菌株M18GU，以便获得携带phzH基因的重组表达质粒的生物工程菌株M18GU/pBBRphzH。
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