[发明专利]一种悬浮培养BHK-21细胞的无血清无动物源培养基及其配制方法

摘要

本发明公开了一种悬浮培养BHK‑21细胞的无血清无动物源培养基及其配制方法，发明通过对培养基中氨基酸、无机盐、维生素、脂类、水解物和其余添加物的添加和组分优化，显著促进了细胞的增殖速度，缩短了倍增时间，使细胞达到更高生长密度的同时保持较高的活力。该培养基是适合BHK‑21细胞高密度悬浮培养的低成本无血清无动物源低蛋白培养基，通过脂类、维生素、微量元素、重组蛋白和水解物等成分的添加完全替代血清的生物学功能，避免了血清对后期纯化和抗原的分离带来的一些负面作用。通过对培养基组分的优化，使得BHK‑21细胞在悬浮培养中增殖速度更快，细胞密度更高，细胞活力更强，更适合于规模化工业生产。

主权项

1.一种悬浮培养BHK‑21细胞的无血清无动物源培养基，其特征在于：包括氨基酸，无机盐，维生素，蛋白水解物，脂类和添加物；所述氨基酸包括L‑丙氨酸、L‑谷氨酰胺、L‑精氨酸盐酸盐、L‑天冬氨酸、L‑天冬酰胺、L‑半胱氨酸一水合物、L‑谷氨酸、L‑异亮氨酸、L‑亮氨酸、L‑赖氨酸盐酸盐、L‑蛋氨酸、L‑苯丙氨酸、L‑脯氨酸、L‑丝氨酸、L‑苏氨酸、L‑色氨酸、L‑酪氨酸二钠盐、L‑缬氨酸、L‑胱氨酸盐酸盐、L‑组氨酸盐酸盐、L‑赖氨酸和甘氨酸；所述无机盐包括无水氯化钙、氯化钠、磷酸氢二钠、六水氯化镁、无水硫酸镁、氯化钾、一水磷酸二氢钠、七水合硫酸锌、九水合硝酸铁、亚硒酸钠、五水硫酸铜和硫酸亚铁；所述维生素包括生物素、氯化胆碱、D‑泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇、磷酸吡哆醛、核黄素、钴胺素、盐酸硫胺素和肌醇；所述蛋白水解物包括酵母超滤物、棉籽水解物、大米水解物和麦麸水解物；所述脂类包括亚油酸、大豆卵磷脂、胆固醇、腐胺和乙醇胺；所述添加物包括D‑葡萄糖、丙酮酸钠、硫辛酸、胸苷、腺嘌呤、胸腺嚓咤、重组胰岛素、柠檬酸铁、环庚三烯酚酮、酚红钠盐、F‑68、碳酸氢钠、还原型谷胱甘肽和次黄嘌呤钠盐；其中所述培养基中各种原料物质的含量分别为：(1)氨基酸：L‑丙氨酸100‑180mg/L，L‑谷氨酰胺200‑300mg/L，L‑精氨酸盐酸盐200‑300mg/L，L‑天冬氨酸100‑150mg/L，L‑天冬酰胺300‑450mg/L，L‑半胱氨酸一水合物10‑50mg/L，L‑谷氨酸50‑150mg/L，L‑异亮氨酸100‑300mg/L，L‑亮氨酸100‑150mg/L，L‑赖氨酸盐酸盐100‑350mg/L，L‑蛋氨酸35‑90mg/L，L‑苯丙氨酸10‑60mg/L，L‑脯氨酸80‑155mg/L，L‑丝氨酸100‑200mg/L，L‑苏氨酸150‑250mg/L，L‑色氨酸100‑150mg/L，L‑酪氨酸二钠盐30‑100mg/L，L‑缬氨酸100‑185mg/L，L‑胱氨酸盐酸盐50‑85mg/L，L‑组氨酸盐酸盐50‑150mg/L，L‑赖氨酸50‑500mg/L，甘氨酸50‑90mg/L，(2)无机盐:无水氯化钙100‑150mg/L，氯化钠5000‑7500mg/L，磷酸氢二钠10‑45mg/L，六水氯化镁50‑80mg/L，无水硫酸镁2‑65mg/L，氯化钾40‑350mg/L，一水磷酸二氢钠20‑50mg/L，七水合硫酸锌0.1‑0.7mg/L，九水合硝酸铁0.01‑0.6mg/L，亚硒酸钠0.01‑0.03mg/L，五水硫酸铜0.0001‑0.003mg/L，硫酸亚铁0.01‑0.2mg/L(3)维生素：生物素0.005‑0.01mg/L，维生素C1‑12mg/L，氯化胆碱0.5‑5mg/L，D‑泛酸钙0.2‑2mg/L，叶酸0.2‑5mg/L，烟酰胺5‑8mg/L，盐酸吡哆醇5‑8mg/L，磷酸吡哆醛0.06‑0.3mg/L，核黄素0.08‑0.6mg/L，钴胺素0.04‑3mg/L，盐酸硫胺素0.05‑0.5mg/L，肌醇5‑8mg/L，(4)脂类添加：亚油酸0.1‑0.3mg/L，大豆卵磷脂15‑20mg/L，胆固醇6‑10mg/L，腐胺0.04‑0.8mg/L，乙醇胺1‑30mg/L，(5)水解物：棉籽水解物500‑4000mg/L，酵母超滤物500‑4000mg/L，大米水解物500‑2000mg/L，麦麸水解物500‑4000mg/L，(6)其余添加物：D‑葡萄糖3000‑6000mg/L，丙酮酸钠100‑250mg/L，硫辛酸0.05‑0.6mg/L，胸苷0.06‑0.5mg/L，腺嘌呤0.1‑5mg/L，胸腺嘧啶0.02‑2mg/L，重组胰岛素3‑25mg/L，柠檬酸铁0.02‑1mg/L，环庚三烯酚酮0.1‑8mg/L，酚红钠盐6‑15mg/L，F‑6850‑600mg/L，碳酸氢钠1200‑2200mg/L，还原型谷胱甘肽0.01‑0.9mg/L，次黄嘌呤钠盐0.1‑5mg/L。