[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的肽适配子文库构建方法有效
| 申请号： | 201410339641.X | 申请日： | 2014-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN104088019A | 公开（公告）日： | 2014-10-08 |
| 发明（设计）人： | 刘宽灿;兰小鹏;林宝顺;赵猛;易浔飞;高安定;张蕊 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军南京军区福州总医院 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C40B40/10;G01N33/68 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350025 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开一种基于双分子荧光互补技术的肽适配子文库构建方法。本发明构建的肽适配子文库容量大、肽适配子构象固定，因此，本发明极具应用价值。本发明有益效果：（1）有效合成了以细菌硫氧还蛋白TrxA蛋白支架构成的TrxA-MCS-TrxA；（2）通过载体构建的方式，将TrxA-MCS-TrxA框架插入至双分子荧光互补载体pBiFc-VC155中，形成pBiFc-VC155-TrxA-MCS-TrxA；（3）设计合成了具有可变阅读框的多肽表达核苷酸序列；（4）利用载体构建的方式，将可变阅读框的多肽表达核苷酸序列插入至pBiFc-VC155-TrxA-MCS-TrxA，转化细菌后，抽提质粒进行测序确认获得表达文库。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 分子 荧光 互补 技术 配子 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种基于双分子荧光互补技术的肽适配子文库构建方法，其特征在于：包括以下步骤：1）根据实验设计，合成包含TrxA‑MCS‑TrxA的核苷酸序列；TrxA‑MCS‑TrxA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；2）应用设计引物，以合成的TrxA‑MCS‑TrxA为模板，对合成序列进行高保真PCR扩增；3）利用酶切连接方法将TrxA‑MCS‑TrxA转移入载体pBiFc‑VC155双荧光互补表达载体，获得载体pBiFc‑VC155‑TrxA‑MCS‑TrxA；4) 设计11个氨基酸的随机对应核苷酸序列，并通过酶切连接方法，插入pBiFc‑VC155‑TrxA‑MCS‑TrxA载体的多克隆位点中；转化细菌后，抽提质粒进行测序确认获得肽适配子文库。
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