[发明专利]一种从血浆中吸附人凝血酶原复合物的方法

摘要

本发明涉及一种采用固定床柱层析技术从血浆中吸附人凝血酶原复合物的生产方法，包括以下步骤（1）去除冷沉淀血浆，使用预先经EDTA溶液和枸橼酸钠溶液清洗过的纤维素深层滤板过滤（2）深层过滤后的血浆在固定床上样时经过0.2μm的滤芯膜在线过滤；（3）装填有阴离子交换凝胶Capto DEAE的固定床层析柱使用缓冲液A平衡2~5个柱体积，血浆上样流速为60~120cm/h，用缓冲液B洗涤层析柱，用缓冲液C洗脱层析柱，得到PCC制品，按照凝血因子IX计算，PCC的收率可以达到75%~90%，比活性可以达到5.5IU/mg以上。

主权项

一种从血浆中吸附人凝血酶原复合物的方法，包括去除冷沉淀、血浆过滤和固定床柱层析分离纯化PCC；具体步骤为：（1）去除冷沉淀：将新鲜冰冻人血浆在融化混匀后，经连续流离心机去除血浆中的冷沉淀，得到离心后的血浆上清液；（2）血浆过滤使用EDTA溶液对过滤材质进行清洗，再用枸橼酸钠溶液对过滤材质进行清洗，并洗去残留的EDTA，冲洗完成后排干设备内的溶液，用于血浆过滤，所采用的过滤材质为药用级别纤维素滤板；（3）固定床柱层析分离纯化PCC将凝胶装填在固定床层析柱内，柱床体积与上样的血浆量的比例为1:10~1:50，装填好的层析柱使用缓冲液A平衡2~5个柱体积，经过过滤后的血浆使用0.2μm的滤芯进行在线的膜过滤后泵入层析柱，上样流速为60~120cm/h，用缓冲液B洗涤层析柱，用缓冲液C洗脱层析柱，得到PCC制品；所述步骤（3）固定床柱层析分离纯化PCC中，所述缓冲液A由25mmol/L枸橼酸钠和20mmol/L盐酸精氨酸组成，所述缓冲液A的pH为7.0；所述步骤（3）固定床柱层析分离纯化PCC中，所述缓冲液B由25mmol/L枸橼酸钠、20mmol/L盐酸精氨酸和0.1~0.4mol/L的NaCl组成；所述步骤（3）固定床柱层析分离纯化PCC中，所述缓冲液C由25mmol/L枸橼酸钠、20mmol/L盐酸精氨酸和0.5~1.0mol/L的NaCl组成。