[发明专利]紫脚板薯组织RNA的提取方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开了紫脚板薯组织RNA的提取方法，在SDS法的基础上，于粉碎材料时，用水不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)防止酚类物质氧化，同时高盐溶液去除多糖污染，采用0.1倍的3M的KAC（pH5.2）和2.5倍的乙醇沉淀RNA。所提取的RNA纯度和完整性均良好，不存在DNA、蛋白、多糖等杂质的污染，便于进行下游的分子生物学实验。

主权项

紫脚板薯组织RNA的提取方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将RNA提取液65度水浴15 min；所述RNA提取液为2% SDS，100 mM Tris，25mM EDTA，2M NaCl溶液； （2）每取0.5 g紫脚板薯组织材料放入预先加好0.03 g聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）的研钵中，加液氮迅速研磨至粉末；（3）粉末转移至离心管中，加0.6 ml RNA提取液和24 μl β‑巯基乙醇，涡旋数秒后水浴10 min；（4）加0.6 ml 体积比24: 1氯仿异戊醇后剧烈震荡1 min后，13000 rpm离心8 min； （5）取上清，加2.5倍体积的乙醇和0.1倍体积的3 mol/L pH5.2 KAC，混匀，冰浴10 min，13000 rpm离心10 min； （6）弃上清，加1 ml 70%乙醇洗涤，13000 rpm离心5 min，弃上清，再稍离心，使残液集于管底，用移液器吸去，置于超净工作台上用无菌风吹2‑5 min, 加43 μl 水溶解；（7）加5 μl DNase Buffer，2 μl DNase，温和混匀，37℃ 30 min；（8）加350 μl 水、200 μl 酸酚、200 μl 氯仿异戊醇，震荡1 min，13000 rpm离心10 min； （9）取上清，加等体积的氯仿异戊醇，氯仿异戊醇体积比24：1，震荡1 min，13000 rpm离心10 min；（10）取上清，加2.5倍体积的乙醇和0.1倍体积的3 mol/L pH5.2 KAC，混匀，冰浴10 min，13000 rpm离心10 min；（11）弃上清，加1 ml 70%乙醇洗涤，13000 rpm离心5 min，弃上清，使残液集于管底，用移液器吸去，置于超净工作台上用无菌风吹2‑5 min, 加适量水溶解。