[发明专利]一种溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核载体构建方法

摘要

本发明公开了一种溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核载体构建方法，包括如下步骤：S1、根据NCBI公布的基因序列，设计ompK基因引物；S2、提取溶藻弧菌基因组DNA；S3、以溶藻弧菌基因组DNA为模板，进行ompK基因的PCR扩增；S4、取PCR扩增产物采用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测PCR片断大小；S5、将PCR扩增产物与pET-23a质粒载体进行BamH I和Xho I双酶切后，通过T4-连接酶将目的基因插入pET-32a质粒中，转化E.coli DH5a菌株。本发明成功构建OmpK表达载体，确定OmpK蛋白菌株的最佳表达条件与培养条件，为OmpK工业发酵、蛋白功能与疫苗开发研究奠定基础。

主权项

溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核载体构建方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、根据NCBI公布的基因序列，设计ompK基因引物：Primer1：5’‑ACAGGATCCATGCGTAAATCACTTTT‑3’；Primer2：5’‑ACTCTCGAGTTAGAATTTGTAAGTTAC‑3’；S2、提取溶藻弧菌基因组DNA；S3、以S2中提取的溶藻弧菌基因组DNA为模板，进行ompK基因的PCR扩增；S4、取S3中的PCR扩增产物采用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测PCR片断大小；S5、将S3中的PCR扩增产物与pET‑23a质粒载体进行BamH I和Xho I双酶切后，通过T4‑连接酶将目的基因插入pET‑32a质粒中，转化E.coli DH5a菌株，提取重组质粒后，进行BamH I和Xho I双酶切鉴定，并对重组质粒进行测序测定，与步骤S1所设计的基因引物进行对比，转化重组质粒入E.coli BL21表达菌株。