[发明专利]一种检测麻痹性贝类毒素的方法

摘要

本发明公开了一种检测麻痹性贝类毒素的方法，该方法在小鼠神经瘤细胞阻抗传感器上实现，本方法首先将neuro2a细胞接种到传感器芯片细胞培养孔进行培养；然后向含有乌本苷和藜芦定溶液的细胞培养孔中分别加入待测溶液；通过检测加入待测溶液后各个细胞培养孔的CI值，根据CI值的变化判断待测溶液中麻痹性贝类毒素的含量。该方法直接以细胞为检测载体，操作简单，成本低廉。该方法对于石房蛤毒素的检测限低至0.9ng/ml，相比与当前的国标检测方法小鼠生物法的检测限（160ng/ml）具有显著的进步，此外，该方法受贝肉基质干扰作用小，数据可靠。

主权项

一种检测麻痹性贝类毒素的方法，该方法在小鼠神经瘤细胞阻抗传感器上实现，所述小鼠神经瘤细胞阻抗传感器由细胞培养孔（1）、细胞阻抗芯片安装台（2）、芯片电路板（3）、芯片连接弯针（4）；细胞培养孔（1）位于细胞阻抗芯片安装台（2）上，芯片电路板（3）与细胞阻抗芯片安装台（2）连接，芯片连接弯针（4）与芯片电路板（3）连接，芯片连接弯针（4）将芯片电路板（3）上的阻抗信号传输给电脑；细胞培养孔（1）中安装有阻抗电极（5）；其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）将细胞融合度达到80‑90%的neuro2a细胞接种到2个细胞培养孔（1）中，每个细胞培养孔（1）中培养液总体积为300 µl，细胞个数为30000个；细胞培养24小时后，每孔用270 µl新鲜的培养液更换原培养液；（2）选取1个细胞培养孔（1）作为实验组，向细胞培养孔（1）加入10 µl待测溶液、10 µl的15 mM的乌本苷和10 µl的1.5 mM的藜芦定溶液；另一个细胞培养孔（1）作为对照组，向每个细胞培养孔（1）加入10 µl培养液、10 µl的15 mM的乌本苷和10 µl的1.5 mM的藜芦定溶液；（3）将传感器芯片放回培养箱继续培养；（4）检测各个细胞培养孔（1）的CI值，当实验组的CI值大于对照组细胞培养孔的CI值时，则判定为该待测溶液含有麻痹性贝类毒素；CI值越高，麻痹性贝类毒素含量越高；所述培养液为RPMI1640培养基，其中添加了体积分数为10%的胎牛血清，质量分数为1%的丙酮酸钠，质量分数为1%的非必需氨基酸、质量分数为1%谷氨酰胺、质量分数为1%的P/S双抗。