[发明专利]用于检测NK细胞活性的试剂盒有效
申请号: | 201410373834.7 | 申请日: | 2014-07-31 |
公开(公告)号: | CN104133058A | 公开(公告)日: | 2014-11-05 |
发明(设计)人: | 张娟;王显凤;刘丽媛;吴纯斌;秦晓明;王绪华;梁超;陈忠;方国伟;黄士昂 | 申请(专利权)人: | 北京海思特临床检验所有限公司 |
主分类号: | G01N33/53 | 分类号: | G01N33/53;G01N21/64 |
代理公司: | 北京天奇智新知识产权代理有限公司 11340 | 代理人: | 陆军 |
地址: | 100176 北京市大兴区亦*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明提供了一种用于检测NK细胞活性的试剂盒。试剂盒包括PBS缓冲液、淋巴细胞分离液、RPMI1640培养液、荧光染料EGFP、抗体7-AAD-percp-cy5.5、荧光染料的载体pEGFP-N1质粒。本发明还提供了一种采用本试剂盒用于检测NK细胞的方法。本方法能节约检测时间和检测成本,且灵敏度高。 | ||
搜索关键词: | 用于 检测 nk 细胞 活性 试剂盒 | ||
【主权项】:
一种用于检测NK细胞活性的方法,包括步骤:(1)取3ml肝素钠抗凝的外周血与PBS缓冲液按照1:1稀释,将稀释后的标本缓慢注入具有2ml淋巴细胞分离液的10ml离心管中,以665g转速离心20min,吸取中间白细胞层;采用PBS清洗2次,然后以393g转速离心10min,去上清液;将500μl RPMI1640培养液加入离心得到的沉淀中,混匀,得到单个核细胞PBMNC,浓度调节为1*106/ml备用;取对数期的K562‑EGFP细胞用PBS洗2次,然后以393g转速离心10min,去上清液,加500μl RPMI1640培养液混匀,放室温静置1h,浓度调节为1*105/ml备用;(2)将100μl K562‑EGFP加入对照管中;将100μl PBMNC+100μl K562‑EGFP加入检测管中;然后将对照管与检测管均放入5%CO2培养箱中孵育2h;(3)将5.520μl抗体7‑AAD‑percp‑cy5.5加入对照管与检测管中,充分混匀,静置1分钟,然后采用流式细胞仪检测细胞活性。
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