[发明专利]基于纤维素代谢通路关键酶的工程菌及其实现方法

摘要

一种基于纤维素代谢通路关键酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA经过全基因合成构建得到载体为模板，分别与对应含有酶切位点的引物进行PCR扩增并对应分别得到编码外切‐β‐1,4‐葡聚糖酶的核苷酸序列、编码内切‐β‐1,4‐葡聚糖酶的核苷酸序列和编码β‐1,4‐葡萄糖苷酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的序列依次连接到共表达载体，最终得到重组共表达载体和重组表达载体；之后将重组共表达载体先后转化到大肠杆菌表达菌株内，获得转基因共表达菌株。本发明应用基因工程手段实现外切‐β‐1,4‐葡聚糖酶、内切‐β‐1,4‐葡聚糖酶和β‐1,4‐葡萄糖苷酶体外的大量表达合成，最终实现纤维素的原位快速降解。

主权项

一种纤维素代谢通路关键酶的工程菌，其特征在于，该工程菌为通过全基因合成获得的外切‐β‐1,4‐葡聚糖酶、内切‐β‐1,4‐葡聚糖酶和β‐1,4‐葡萄糖苷酶基因的重组过表达菌株；所述的纤维素代谢通路关键酶是指灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)JSD‐1外切‐β‐1,4‐葡聚糖酶、内切‐β‐1,4‐葡聚糖酶和β‐1,4‐葡萄糖苷酶，其中：外切‐β‐1,4‐葡聚糖酶的核苷酸序列EX，如SEQ ID No.1所示，内切‐β‐1,4‐葡聚糖酶的核苷酸序列EN，如SEQ ID No.2所示，β‐1,4‐葡萄糖苷酶的核苷酸序列BG，如SEQ ID No.3所示。