[发明专利]一种水稻种胚RNA的提取方法

摘要

本发明涉及一种提取水稻种胚RNA的方法，包括如下步骤：剥取10粒种胚装入EP管中，立即加入200ulTripure，用尖头玻璃棒快速捅碎，加入800ulTripure，迅速颠倒30s以上，室温静置10min；加入200ul的氯仿，颠倒混匀，室温静置10min；4℃12000g离心10min，吸取上清约450ul加入等量冰异丙醇，轻轻颠倒混匀，室温静置10min；4℃12000g离心15min，弃上清并加入1ml75％乙醇，轻轻吹打沉淀，使之飘起，4℃12000g离心3min，弃上清；重复前述步骤；将空管12000g离心2min，吸干余液，放置大约30s，立即加入30-60ulRNase-freewater，轻轻吹打数次，使沉淀溶解，随后水浴65℃5min。该方法提取的水稻种胚RNA具有得率高、完整性好等优点。

主权项

一种水稻种胚RNA的提取方法，步骤如下：(1) 将10粒种子剥胚，将胚装入EP管中，立即加入200ul Tripure，用尖头玻璃棒快速捅碎，加入800ul Tripure，迅速快速颠倒振荡30s以上，室温静置10min ；(2) 加入200ul的氯仿，颠倒振荡使两相充分混合，室温静置10min；(3) 4 ℃ 12000g离心10min，吸取上清约450ul加入等量冰异丙醇，轻轻颠倒振荡充分混合，室温静置10min ；(4) 4℃ 12000g离心15min，弃上清并加入1ml 75％乙醇，轻轻吹打沉淀，使之飘起，4℃ 12000g离心3min，弃上清；(5) 重复 (4)，500ul乙醇即可；(6) 将空管12000g离心2min，吸干余液，放置大约30s，立即加入30‑60ul RNase‑free water，轻轻吹打数次，使沉淀溶解，随后水浴65℃ 5min使其充分溶解并打开二级结构；(7) 如果RNA不立即使用，步骤6加入乙醇后，放置－20℃保存，待用时，取出4℃ 离心后弃上清进行步骤6；(8) 溶解的RNA最好立即测定OD，用1xTBE配制1％ 琼脂糖电泳220v 11min跑电泳，操作必需在冰上进行，RNA可保存在－20℃短期保存或‑80℃长期保存，如果RNA重新冻融必须吹打混匀后进行后续实验。