[发明专利]一种以Pro-BDNF的形式制备人脑源性神经营养因子的方法

摘要

本发明公开了一种以Pro-BDNF的形式制备人脑源性神经营养因子的方法。人工合成pro-hBDNF序列后克隆入载体得到含有pro-hBDNF的重组载体；再转化到大肠杆菌中，得到工程菌；包涵体表达；包涵体的复性：包涵体裂解、洗涤、溶解、复性；的分离纯化；质量比pro-rhBDNF：胰蛋白酶=250:1的胰蛋白酶酶切去除pro-rhBDNF前导肽获得rhBDNF成熟肽；rhBDNF成熟肽的纯化；最后获得纯度超过95%的重组人脑源性神经营养因子。利用胰蛋白酶酶切pro-rhBDNF，在该比例下可以完全消化pro-rhBDNF的导肽，而不会消化rhBDNF成熟肽。同时该方法制备简单易行，便于实施。

主权项

一种制备人脑源性神经营养因子的方法，其特征在于，包括如下步骤，表达载体及工程菌的构建：人工合成pro‑hBDNF序列，将其序列克隆入载体得到含有pro‑hBDNF的重组载体；再将其转化到大肠杆菌中，得到工程菌；pro‑rhBDNF的包涵体表达；pro‑rhBDNF包涵体的复性：pro‑rhBDNF包涵体裂解、洗涤、溶解、复性；pro‑rhBDNF的分离纯化；rhBDNF成熟肽的分离纯化：胰蛋白酶酶切去除pro‑rhBDNF前导肽获得rhBDNF成熟肽；rhBDNF成熟肽的纯化。