[发明专利]一种巢式PCR数字定量方法有效
| 申请号： | 201410396994.3 | 申请日： | 2014-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN104195236A | 公开（公告）日： | 2014-12-10 |
| 发明（设计）人： | 谢兵 | 申请（专利权）人： | 北京恩济和生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京金知睿知识产权代理事务所(普通合伙) 11379 | 代理人： | 林俐;殷根娣 |
| 地址： | 102200 北京市昌*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种巢式数字PCR定量方法，其特征是改进的巢式PCR及样本10倍稀释梯度分散至有限单元的数字PCR方法，包括下列步骤：在每个反应单元中预先加入矿物油,在矿物油下方加入1-5μL小体积的第一轮PCR混合液，所述混合液包括等体积的2×反应液和连续10倍稀释梯度的样本液，在第一退火温度下使用外侧引物进行第一轮扩增；随后在第一轮扩增产物中加入10-20倍于第一轮PCR体积的第二轮PCR反应液，在第二退火温度下使用内侧引物进行第二轮扩增；最后检测扩增产物，进行计数定量。本发明还提供了用于本发明的巢式数字PCR定量方法的基因检测试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 pcr 数字 定量 方法 | ||
【主权项】：
一种巢式数字PCR定量方法，其特征是改进的巢式PCR及样本10倍稀释梯度分散至有限单元的数字PCR方法，包括下列步骤：在每个反应单元中预先加入矿物油,在矿物油下方加入1‑5μL小体积的第一轮PCR混合液，所述混合液包括等体积的2×反应液和连续10倍稀释梯度的样本液，在第一退火温度下使用外侧引物进行第一轮扩增；随后在第一轮扩增产物中加入10‑20倍于第一轮PCR体积的第二轮PCR反应液，在第二退火温度下使用内侧引物进行第二轮扩增；最后检测扩增产物，进行计数定量。
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