[发明专利]基于质谱的氧连接氮乙酰葡糖胺修饰糖蛋白质的分析方法

摘要

本发明涉及一种基于质谱的氧连接氮乙酰葡糖胺(O‑GlcNAc)修饰糖蛋白质分析方法。所述的O‑GlcNAc修饰糖蛋白质蛋白酶酶解后生成肽段，利用高碘酸钠氧化，修饰基团氮乙酰葡糖胺上的对位羟基进行开环反应形成两个醛基基团，利用吉拉德试剂T(Girard Reagent T)上的酰阱和新生成的醛基反应，从而使O‑GlcNAc修饰糖肽的化学衍生上季铵盐基团。季铵盐基团的存在能够有效地增强肽段的质谱响应信号，并且衍生后的糖肽在保留一定原糖修饰基团，进行后续质谱，通过数据库搜索等分析手段对该种糖基修饰的糖蛋白质进行分析鉴定。

主权项

1.基于质谱的氧连接氮乙酰葡糖胺修饰糖蛋白质的分析方法，其特征为：首先将O‑GlcNAc修饰糖蛋白质采用蛋白酶酶解生成肽段；之后，以高碘酸钠作氧化剂，对修饰的氮乙酰葡糖胺基团上的邻位羟基进行开环反应形成两个醛基基团；利用吉拉德试剂T上的酰阱和新生成的醛基反应，从而使糖肽化学衍生上季铵盐基团；然后进行质谱鉴定和分析;通过二级质谱获得肽段的碎片信息，经过数据库搜索等分析手段对该种糖基修饰的糖蛋白质进行分析鉴别;采用液质联用，对肽段进行分离后采用质谱进行样品分析；利用碰撞诱导解离（Collision‑induced dissociation，CID）模式对肽段进行二级碎裂，对于离子阱质谱，CID能量控制在30‑50%；采集数据利用蛋白质组数据库搜索引擎进行糖肽的信息利用分析;由于目前有多款通用的蛋白质组数据库搜索引擎，其具体参数设置略有不同；因此针对该氧连接氮乙酰葡糖胺修饰参数设置中，需做出特别调整的有：1)增加可变修饰的设置，修饰分子式C13H22N4O5，修饰位点丝氨酸和苏氨酸残基；2) 增加可变修饰的设置，修饰分子式C18H33N7O5，修饰位点丝氨酸和苏氨酸残基；3) 增加可变修饰：修饰分子式C2H4，修饰位赖氨酸残基；4）修饰分子式C2H4，修饰位点肽段氮末端；搜库结果进一步处理，为增加结果的可信度，利用二级质谱图中的特征峰进行进一步筛选；对于修饰了一分子吉拉德试剂T的修饰肽段，二级谱中应包含特征峰M/z=315.16，对于修饰了两分子吉拉德试剂T的修饰肽段，二级谱中应包含特征峰M/z=214.625。