[发明专利]微生物发酵生产9α-羟基雄烯二酮的方法

摘要

本发明提出了一种微生物发酵生产9α‑羟基雄烯二酮的方法，利用重组耻垢分枝杆菌发酵转化植物甾醇生产9α‑羟基雄烯二酮，包括如下步骤：重组表达载体pMV261‑ksh的构建；重组菌株的构建；菌种繁殖及发酵转化。本发明通过基因工程手段获得3‑甾酮‑9α‑羟基化酶基因(ksh)过表达的基因工程菌株，该菌株经过120h发酵可以使植物甾醇的转化率高达95％以上，具有产率高、副产物少、发酵时间短，且提取简单、污染小、环保压力小等特点，极具工业生产的优势。

主权项

1.一种微生物发酵生产9α‑羟基雄烯二酮的方法，其特征在于：利用重组耻垢分枝杆菌发酵转化植物甾醇生产9α‑羟基雄烯二酮，包括如下步骤：第一步，重组表达载体pMV261‑ksh的构建；首先，通过PCR技术获得来源于耻垢分枝杆菌mc2155且带有酶切位点的ksh基因；所述酶切位点分别为EcoRI和HindIII；所述ksh基因为3‑甾酮‑9α‑羟基化酶基因；其次，将其与克隆载体pMD‑18T连接，以获得该基因的大量克隆；再次，进行双酶切、片段纯化，之后与耻垢分支杆菌表达载体pMV261连接；最后，将得到的连接体系转入大肠杆菌DH5α感受态细胞中，得到重组质粒；第二步，重组菌株的构建；第三步，菌种繁殖及发酵转化。