[发明专利]一种同时检测玉米中产AFB1、ZEN、DON真菌的方法

摘要

本发明涉及一种同时检测玉米中产AFB1、ZEN、DON真菌的方法，对玉米样品中的DNA进行提取，分别根据编码AFB1、ZEN、DON合成的基因aflR、PKS13、tri5筛选了三对引物组合，并筛选出三种引物组合的多重PCR反应条件，并采用多重PCR法对所提取的DNA中的三个目的基因进行扩增，从而建立了一种能够同时快速检测玉米中三种产毒素真菌的方法。

主权项

一种同时检测玉米中产黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素真菌的方法，其特征在于所采用的引物组合为：一对针对aflR的特异性引物SEQ1和SEQ2；一对针对PKS13的特异性引物SEQ3和SEQ4；一对针对tri5的特异性引物SEQ5和SEQ6；SEQ1：5'‑GCACCCTGTCTTCCCTAACA‑3'SEQ2：5'‑ACGACCATGCTCAGCAAGTA‑3'SEQ3：5'‑CTGAGAAATATCGCTACACTACCGAC‑3'SEQ4：5'‑CCCACTCAGGTTGATTTTCGTC‑3'SEQ5：5'‑GCTGCTCATCACTTTGCTCAG‑3'SEQ6：5'‑CTGATCTGGTCACGCTCATC‑3'上述引物组合的使用方法如下：1)常规方法提取玉米样品DNA,进行PCR反应；反应体系为：10×Taq PCR Buffer(含Mg2+)：2.5μL；dNTP Mix(2.5mM each)：2.0μL；引物aflR、PKS13、tri5的上游引物各1.0μL，下游引物各1.0μL；提取到的DNA：500ng；Taq DNA酶(5U/μL)：0.25μL；用不含RNA酶的灭菌水定容至25μL。多重PCR扩增程序如下：首轮循环：预变性，94℃，2min；中间循环：变性，94℃，30s；复性，60℃，30s；延伸，72℃，30s；进行30个循环末轮循环：延伸，72℃，10min；2)对步骤2)得到的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶检测:如果从样品中扩增出192bp的产物，则待检玉米样品中有产生ZEN的真菌；如果从样品中扩增出400bp的产物，则待检玉米样品中有产生AFB1的真菌；如果从样品中扩增出658bp的产物，则待检玉米样品中有产生DON的真菌。