[发明专利]保持细胞应力平衡条件下检测SSBs结合状态的装置及方法

摘要

本发明公开了一种保持细胞应力平衡条件下检测SSBs结合状态的装置及方法，该装置包括圆管细胞电泳槽，管壁中部，沿其纵轴方向开有一矩形槽口，电泳缓冲液池，侧连接通道，滤膜，孔径为0.2μm或0.45μm亲水聚苯醚砜滤膜，所述电泳缓冲液池与侧连接通道铸成一体，侧连接通道与电泳槽通过可拆卸的方式密封连接，滤膜插在侧连接通道与电泳槽的连接处。本发明的装置能够使细胞在保持原细胞结构完整性的条件下分离结合态SSBs与非结合SSBs。本发明巧妙的将细胞原位电泳与细胞流式分析术结合，检测结果准确。

主权项

一种保持细胞应力平衡条件下检测SSBs 结合状态的方法，具体包括以下步骤：（1）细胞预固定：分离细胞，加入磷酸盐缓冲液制成细胞悬液，将上述细胞悬液涂布于培养皿底部，将上述培养皿置于≤0℃条件下用UV 灯照射后，用磷酸盐缓冲液收集培养皿中的细胞，离心弃上清液后加入4%的多聚甲醛预固定1‑6sec，预固定完成后加入打孔剂，所述打孔剂能使细胞膜和细胞和都打孔，打孔5‑15min；（2）细胞原位电泳：将上述打孔后的细胞团加入电泳缓冲液制成细胞悬浮，恒压模式下，在电泳槽阴极侧滴入细胞悬液，电泳完成后用移液器吸净电泳槽中的液体，并将吸出液汇集于一离心管中，用电泳缓冲液冲洗电泳槽，重复电泳过程，直至细胞悬液全部完成电泳；（3）检测：使用流式细胞术分析检测。